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肺癌是全世界公认的恶性肿瘤之一,严重危害人类的生命安全,其中非小细胞肺癌占肺癌总量的75%-85%。大部分肺癌在确诊时已处于中晚期。对于处于二、三期的非小细胞肺癌患者,主要集中于化疗和放疗这两种传统的治疗方法,但经治疗的肺癌患者五年平均生存率仅为15%。近年来随着分子生物学机制的研究,非小细胞肺癌分子靶向治疗取得了很大进展。以表皮生长因子受体(EGFR)为靶标的酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼、厄洛替尼在治疗晚期非小细胞肺癌中受到普遍关注,经吉非替尼治疗的中晚期非小细胞肺癌患者,比传统化放疗治疗的总生存期明显延长；而女性、亚裔、非吸烟、腺癌患者从吉非替尼和厄洛替尼的治疗中获益较多,而这些人群更容易发生EGFR基因突变,临床研究发现,携带EGFR基因突变的患者对KTIs更为敏感,总生存期和无进展生存期较无EGFR基因突变的患者显著增加。因此,对肺癌患者进行EGFR基因检测,是应用KTIs治疗的重要前提。本研究的主要目的是建立高特异性和灵敏性的EGFR基因突变检测方法,以便用于临床检测,为非小细胞肺癌靶向用药提供指导。EGFR基因突变主要集中于18～21共四个外显子。本研究涉及了其中三个外显子的4个点突变和19种缺失突变。基于RT-PCR平台,设计特异性的ARMS检测引物,建立了检测各个突变的方法。本研究首先建立了各个突变位点的阳性克隆,模拟基因组DNA；然后对实验条件进行优化,选择合适的ARMS引物进行实验,评估检测方法的特异性和灵敏度；最后,用已建立的方法和已有试剂盒对非小细胞肺癌临床样本进行检测,通过比较两种方法检测结果的差异,来评价本研究所建立的EGFR基因突变检测方法的有效性。本研究成功建立了EGFR基因19外显子的17种缺失突变克隆,最终筛选确定了检测L858R、T790M和S768I三个点突变的ARMS引物、19外显子的19种缺失突变的ARMS引物,检测的敏感性均可达到0.5～0.1%。通过与试剂盒对样本检测结果的比较,评价了所建立方法的检测效果。此方法可以用于临床样本的检测。