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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是自体免疫性系统疾病,其病程持续期长、以滑膜炎症为主,目前其病因未明,RA可造成患者的关节软骨、骨的侵袭甚至于破坏,发展至后期可使关节强直畸形。RA典型的病理表现为患者关节滑膜异常增生,伴随炎症细胞浸润、新生血管形成等免疫炎性症状。其中成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的持续激活、过度增殖在类风湿关节炎中扮演了十分重要的角色。RA-FLS可明显发现其生物学特点产生转化细胞特征,与此同时,正常关节滑膜细胞不会出现该变化。JAK/STAT信号转导通路是当前研究中比较受关注的信号转导通路之一。该通路主要使得胞外的化学信号与细胞上的相应受体结合,并跨越细胞膜,通过一系列反应将胞外信息传送到细胞核内DNA上,与DNA序列结合,激活基因启动子,最终引起DNA转录与活性水平发生改变。该通路的整个信号传递系统主要受细胞因子的介导,广泛参与了生物体内的细胞增殖、分化、凋亡、免疫调节等众多生物生化过程。目前,针对JAK/STAT信号通路为靶点的研究也初步展现成效,并开发出了相应靶向药物或抑制剂并用于治疗RA,因此,深入研究JAK/STAT信号通路在RA中可能的作用与角色,有助于揭示RA发病机制,并为寻找安全有效药物治疗RA提供基础理论依据。威灵仙为传统祛风湿中药,中医上用药已多年,被广泛应用于治疗风湿痹痛,肢体麻木、屈伸不利等。威灵仙总皂苷(Total Saponins of Clematis,TSC)是从威灵仙中提取的有效部位,前期课题组研究表明,TSC具有抗炎镇痛、调节免疫等作用。本实验采用弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)诱导的关节炎大鼠模型,首先从整体水平考察了TSC对AA(adjuvant induced arthritis,AA)大鼠的作用,进一步在体外实验中从分子和细胞水平探讨TSC抑制RA-FLS的分子机制,观察TSC对RA-FLS的增殖的影响,并探讨了对JAK2/STAT3信号通路的调控作用,以期阐明TSC抗RA的作用机制。本研究包括以下二个部分:一、TSC对FCA诱导的AA大鼠的保护作用建立FCA诱导的AA大鼠模型,设立正常组、模型组、TSC给药组(50mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)、雷公藤多苷组(10 mg/kg)。结果显示,TSC对FCA诱导的AA大鼠具有较好的保护作用。TSC可有效缓解AA大鼠体重减轻,明显抑制AA大鼠足肿胀,降低关节评分,改变细胞浸润,减少血管翳生成,下调大鼠血清中IL-6水平、提高IL-10表达水平;同时,TSC可有效抑制JAK2、STAT3 m RNA表达,降低p-JAK2、p-STAT3蛋白阳性表达,同时可降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的相对表达。二、探讨TSC对RA治疗作用的分子机制1.TSC对RA-FLS增殖的抑制作用建立体外RA-FLS细胞模型,TSC在0.5、2.5、12.5、62.5、312.5、1562.5μg/ml浓度可抑制RA-FLS增殖,抑制率与TSC浓度呈浓度依赖性。2.TSC对RA-FLS JAK2/STAT3信号通路的影响实验结果显示,TSC可下调JAK2、STAT3 m RNA相对表达,上调SOCS3、SHP-1m RNA相对表达,并抑制p-JAK2、p-STAT3蛋白阳性表达;同时,TSC可降低p-JAK2、p-STAT的蛋白相对表达,并上调SOCS3、SHP-1蛋白相对表达,提示TSC可通过调控JAK2/STAT3通路来达到抗RA作用。