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前言胃癌是严重威害人类健康的最常见恶性肿瘤之一,其发病率居所有恶性肿瘤的第四位,是癌症死亡原因的第二位。长期以来包括手术切除及其他综合性治疗的应用,并没有带来满意的生存率,胃癌至今仍是全球人口主要癌症死亡,在中国与其他东南亚尤其重要。随着肿瘤分子生物学研究的研究为肿瘤的药物治疗提供了一种新的模式:分子靶向治疗(molecular targeting therapy),靶向治疗制剂的高效低毒特性越来越引起临床医师大的重视,目前分子靶向药物的发展,大多集中在与细胞生长、分化以及各种细胞凋亡调控机制的信号传导路径,这些信号传导路径是通过细胞分子因子的活化来调控。研究表明Bcl-2 NF-κB与肿瘤的形成、分期、转移、预后及疗效密切相关,同时他们在分子靶向治疗中发挥重要作用。国内外尚无对Bcl-2,NF-κB于胃癌中的表达及其相关性的联合研究,本研究制作胃癌组织芯片,应用免疫组化的方法,检测两种蛋白在胃癌中的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系,以及两者之间的相互联系,旨在探讨Bcl-2,NF-κB在胃癌组织中的表达及其临床意义。材料与方法1、研究对象收集中国医科大学附属第一医院及辽宁省肿瘤医院2005年10月-2006年8月手术切除的胃癌组织标本124例。其中男性92例,女性32例。年龄24-85岁,中位年龄60岁。所有患者术前均未接受化疗、放疗。病理均为腺癌,高分化(乳头状腺癌,高分化管状腺癌)11例,中分化(中分化管状腺癌)29例,低分化(低分化腺癌,印戒细胞癌,粘液腺癌)84例。组织分期采用1997年国际抗癌联盟(UICC)制定的TNM临床分期标准,癌组织浸润深度划分如下:T1粘膜层或粘膜下层,T2肌层或浆膜下,T3穿透浆膜,T4侵犯临近结构;其中T1为3例,T2为73,T3为40例,T4为8例;未发生淋巴结转移24例,发生淋巴结转移100例;发生远处转移者5例,未发生者119例;Ⅰ期17例,Ⅱ期46例,Ⅲ期37例,N期24例。2、仪器光学显微镜、恒温箱、切片架、标本缸、湿盒、加样器。3、试剂鼠抗人Bcl-2单克隆抗体(工作浓度为即用型)购自福州迈新生物技术开发有限公司;鼠抗人NF-KB单克隆抗体(工作浓度为1:100)购自SANTA CRUZ公司;SP试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。4、实验方法将124例胃癌标本制作成组织芯片,技术由上海芯超生物科技有限公司提供,采用免疫组化S-P法,按照S-P检测试剂盒说明书所示步骤进行。5、结果判断Bcl-2,NF-κB均以胞膜和/或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色,于显微镜400倍视野下随机选取5个有代表性的不同区域,每个视野的得分由阳性细胞的比例和显色强度两方面决定,结果判定采用双盲法,由2位病理科医师对染色结果复阅核定。依照阳性细胞比例:<10%,10%-25%,25%-50%、>50%分别得0分、1分、2分、3分;依照显色强度:未着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别得0分、1分、2分、3分;将两项得分相乘得到该视野的最终得分,选取的5个视野得分的平均值为最后得分。最后该切片按照得分分为以下四个等级:0-1分为(-),2-4分为(+),>5分为(++)。(-)为阴性,(+)为弱阳性表达,(++)为阳性表达。6、统计学处理所有数据统计均应用SPSS 13.0软件包进行,采用x~2检验、校正x~2检验及Spearman等级相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。实验结果1、Bcl-2,NF-κB在胃癌组织中的表达Bcl-2,NF-κB在124例胃癌组织中阳性表达率分别为54.0%(67/124),83.1%(103/124)。2、胃癌组织中Bcl-2蛋白和NF-KB蛋白表达之间的相关性我们发现,两种蛋白的表达强度之间存在一定的相关性。采用Spearman等级相关检验方法显示,NF-KB和Bcl-2的表达强度呈正相关,相关系数及P值为r=0.260,P=0.004(见表3)。Bcl-2,NF-KB的表达与胃癌临床病理特征的关系在胃癌中,Bcl-2的表达与分化程度的Spearman的相关系数为-0.219(P=0.042),这说明Bcl-2的表达与分化程度呈负相关,但与浸润深度、性别、淋巴结转移及病理分期、远处转移等其他临床病理因素无显著相关性(P>0.05)。NF-KB蛋白表达与病理分期、分化程度有关,而与性别、浸润深度、淋巴结转及远处转移无关在胃癌中,NF-KB表达与分化程度、病理分期的Spearman的相关系数分别为-0.250(P=0.016),0.235(P=0.008),这说明NF-KB的表达与病理分期呈正相关,与分化程度呈负相关,但与性别、浸润深度、淋巴结转移及远处转移等其他临床病理因素无显著相关性(P>0.05)。3、胃癌组织中Bcl-2蛋白和NF-KB蛋白表达之间的相关性我们发现,两种蛋白的表达强度之间存在一定的相关性。采用Spearman等级相关检验方法显示,NF-KB和Bcl-2的表达强度呈正相关,相关系数及P值为r=0.260,P=0.004结论1、Bcl-2,NF-κB在胃癌中高表达水平;Bcl-2,蛋白表达与分化程度呈负相关,NF-κB蛋白的阳性表达与病理分期呈正相关,与分化程度呈负相关。提示Bcl-2,NF-κB的表达可能与胃癌的发生发展有关系。2、两种蛋白的表达强度之间呈正相关,可能提示二者在促进胃癌的发生发展中存在某种依存性或相关性,对其分子通路的深入研究有可能为胃癌的治疗提供新的靶位点