HMG的实时干预对小鼠卵巢移植结局影响的研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyangyingzi
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卵巢组织冻存与移植作为保存和恢复女性生殖功能的一种手段,给许多因POF或卵巢切除抑或先天卵巢发育不良而导致内分泌失调、生育能力丧失的患者带来了希望。卵巢皮质片的冻存及解冻后的无血管吻合移植较整体卵巢的冻存和移植更简便、经济、易于操作,且可以避免血管吻合后极易发生的血栓形成。但术后的缺血期及缺血-再灌注损伤常导致原始卵泡大量丧失,使得移植后卵巢成活率及功能低下,卵巢生存期缩短。有研究认为卵巢组织移植后促性腺激素的分泌有助于移植物的血管重建。目的探索体外及移植时HMG的干预对卵巢移植血管重建的影响及部分机制研究。方法1.青春期小鼠半卵巢在含0.00IU/mL、0.15IU/mL、0.30IU/mL、0.60IU/mL的培养液中体外培养12h、24h、48h后,通过免疫组织化学法,观察卵巢组织VEGF表达;2.将青春期小鼠半卵巢移植前在含0.00IU/mL、0.15IU/mL、0.30IU/mL、0.60IU/mL培养液体外培养3h后进行自体异位移植,通过墨汁灌注法观察不同移植部位血管密度的区别;移植24h、36h卵巢血流贯通的时间及移植物周围及移植物内的组织液渗出量;移植72h卵泡凋亡蛋白阳性表达率;移植1月后不同HMG干预浓度对卵泡存活的影响。结果1.不同移植部位在HMG干预下血管化时间存在差异:肾组织血管密度(406.90±61.53)明显大于颈部皮下组织(133.38±2.26),P<0.001;肾被膜下移植组24h可见有贯穿肾组织至卵巢组织之间的血管,而颈部皮下移植组36h未见血供建立。肾被膜下移植组正常卵泡计数(9.38±5.82)较多,与颈部皮下移植组(5.57±1.12)相比差异具有显著性,P<0.05;2.不同HMG浓度对体外培养卵巢组织VEGF表达及移植后血管重建的差异:(1)干预组各培养时间段内VEGF表达量均随着HMG浓度的增大而升高。无干预组(0.00IU/mL HMG)、低浓度组(0.15IU/mL HMG)和中浓度组(0.30IU/mL HMG)显示培养12h表达量最多,随着培养时间的延长,VEGF表达量呈现微弱减少。而高浓度组(0.60IU/mL HMG)在各时间段均显示最高的表达量,表达高峰出现在培养24h(95.52±12.05),表达量与其它各组相比差异均有显著性,(P<0.001)。(2)不同HMG干预浓度对移植物的影响:①移植36h渗出面积随着HMG干预浓度的增大而增大,高(0.08±0.04)、中(0.06±0.03)、低浓度(0.03±0.02)各浓度组间差异均具有显著性(P<0.001);②中、高浓度干预组移植24h时,墨汁灌注法及免疫组化法均可见移植物与受体间建立血供,而移植36h时在低、中、高浓度干预组均可见有贯穿肾组织至卵巢组织之间的血管被墨汁填充。组织学观察可见卵泡保存完好,可见各发育阶段的卵泡;3、HMG的短暂干预对移植卵巢卵泡发育的影响:①高浓度HMG组短暂干预后移植组72h正常卵泡计数及卵泡凋亡阳性表达率:非干预培养移植组正常卵泡计数(CTG , 5.00±1.10)最低,与新鲜移植组(FTG , 9.57±2.82)和高浓度组(HMG0.60-CTG , 9.00±1.98)相比均具有显著性差异,P<0.001;FTG与HMG0.60-CTG数量相似,P>0.05;CTG Bcl-2蛋白阳性表达率(48.08±19.84)最低,与其它各组相比均有显著性差异,P<0.001;Bax蛋白阳性表达率CTG最高(34.61±17.00),与FTG相比有显著性差异,P<0.05;CTG Caspase-3蛋白阳性表达率(54.41±44.10)最高,与其它各组相比有显著性差异,P<0.05。Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白阳性率HMG0.60-CTG与FTG相似,无显著性差异。②移植后CTG动情周期开始天数较长(6.83±0.75),与其它各组相比有显著性差异,P<0.05,其余各组动情周期恢复率无显著性差异。移植1月时,结果显示,干预组存活卵泡总数明显高于非干预组;HMG0.15-CTG高于其它干预组和新鲜移植组,P<0.05,HMG0.60-CTG(6.91±2.51)的卵泡总数明显低于HMG0.15-CTG(9.36±3.02)和FTG(8.04±2.85),P<0.05。结论①卵巢移植部位血管密度的大小将影响促性腺激素对移植后血供重建的效果;②移植前的HMG体外短暂干预及移植时对移植部位的实时干预可缩短移植卵巢与移植部位血供重建的时间。③卵巢VEGF的表达随体外HMG干预浓度的增大而增高,移植部位早期血浆渗出量也随浓度的增大而增多;④HMG前期干预有利于自体移植卵巢卵泡的存活,0.15IU/mL在保存移植物卵泡数量上优于0.30IU/mL和0.60IU/mL浓度组。
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