论文部分内容阅读
目的：观察Ahi1/Hap1蛋白复合体在抑郁发生后及予以抗抑郁药治疗后的变化，探讨抑郁症可能的发病机制。方法：将ICR小鼠随机分为2组，对照（Con）组、实验（Stress）组；采用空间行为限制建立小鼠抑郁样表型模型；通过小鼠行为学实验（如强迫游泳实验和悬尾实验）观察小鼠是否存在抑郁样表型；采用高效液相色谱法(high performanceliquid chromatography，HPLC)测定脑组织中五羟色胺(serotonin，5-HT)、多巴胺(dopamine， DA)这两种神经递质的含量；采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linkedimmunosorbent assay method，ELISA)测定脑组织及血清中脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、皮质醇的含量；使用Western bolt法测定不同部位脑组织内Ahi1、Hap1蛋白的表达情况；用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)测定脑组织内信使核糖核苷酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）的含量。为研究Ahi1、Hap1蛋白是否作为抗抑郁药治疗作用的一个靶点，将小鼠随机分为4组， Con+盐水（NS）组、Con+丙咪嗪（IM）组、Stress+NS组、Stress+IM组。第一周对Stress组进行空间行为限制；第二周开始，空间行为限制前，IM组给予腹腔注射IM(20mg/kg体重)，NS组给予腹腔注射相同剂量生理盐水；腹腔注射三周后观察行为学及脑组织中Hap1及Ahi1蛋白的改变。结果：悬尾实验（Tail suspension test, TST）和强迫游泳实验（forced swimmingtest, FST）表明Stress组小鼠的不动时间较对照组明显增长(P＜0.05)；HPLC结果显示Stress组小鼠脑组织中5-HT、DA的含量明显降低(P＜0.05)；ELISA检测显示Stress组脑组织及血清中BDNF含量明显降低(P＜0.05)，血清中皮质醇含量明显升高(P＜0.05)。Western blot结果显示Stress组不同部位脑组织内Ahi1、Hap1蛋白的表达降低；且造模时间越长，蛋白降低越明显。RT-PCR结果显示Stress组脑组织内Ahi1mRNA的含量较Con组无明显变化（(P＞0.05）。造模一周后及IM治疗三周后，实验结果显示Stress+IM组在TST、FST中不动时间较Stress+NS组明显缩短(P＜0.05)，糖水偏好实验中糖水消耗明显增加(P＜0.05)；Ahi1、Hap1蛋白的表达较Stress+NS组明显升高(P＜0.05)，与Con组无明显差异（(P＞0.05）。结论：抑郁样表型的小鼠脑组织中Ahi1、Hap1蛋白的表达降低；使用抗抑郁药干预可反转Hap1、Ahi1蛋白的降低，提示Ahi1、Hap1蛋白可能在抑郁样行为的发生过程中具有调节作用，是抗抑郁药研究的的一个潜在靶点。