【摘 要】
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目的:观察ELAV1基因对去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞的作用及相关机制研究。方法:应用qRT-PCR、Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法检测去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞、正常
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目的:观察ELAV1基因对去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞的作用及相关机制研究。方法:应用qRT-PCR、Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法检测去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞、正常前列腺上皮RWPE-1细胞中ELAV1基因和蛋白表达水平,同时收集12例去势抵抗性前列腺癌和癌旁标本采用免疫组化法检测ELAV1蛋白在细胞核和细胞质中的表达情况。将Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP转染前列腺癌PC-3细胞来对细胞中的ELAV1进行沉默,通过CCK-8检测PC-3细胞增殖能力的变化、流式细胞仪检测细胞周期的变化和Western blot检测细胞中COX-2、Cyclin D1、PI3K、Akt、pAkt的蛋白表达变化。建立前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤模型27只,采用随机数字表法将其分为3组,每组9只,分别给予瘤内注射Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP、Ad5.-GFP、生理盐水,每3天测量1次移植瘤体积观察移植瘤生长情况,并于2周后收取移植瘤进行称重并进行数据统计。结果:qRT-PCR、Western blot结果显示PC-3细胞中ELAV1基因和蛋白表达水平均高于RWPE-1细胞,免疫荧光、细胞免疫组化显示PC-3细胞中的ELAV1蛋白主要集中表达于细胞质,而在RWPE-1细胞中则主要表达于细胞核。12例前列腺癌和癌旁组织标本免疫组化结果也同样显示ELAV1蛋白在前列腺癌中主要表达细胞质,在癌旁组织中主要表达于细胞核。CCK-8、细胞周期等实验结果显示PC-3细胞中ELAV1基因被沉默后其增殖能力下降、细胞周期被阻滞在G1期。Western-blot实验证实与肿瘤细胞生长有关的COX-2、与肿瘤细胞周期阻滞有关的Cyclin D1表达明显降低;此外,肿瘤信号通路相关分子PI3K、Akt及磷酸化Akt的表达均下降。裸鼠移植瘤收取后显示Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP移植瘤的体积和重量与对照病毒Ad5.-GFP组相比明显减小(P<0.05)。结论:ELAV1蛋白在前列腺癌中高表达且主要表达于细胞质;ELAV1蛋白通过PI3K/Akt经典肿瘤信号通路对前列腺癌细胞的生长起着促进作用。
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