转OxO拟南芥抗菌核病的机理研究

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菌核病是由核盘菌属引起的恶性疾病,对作物生长发育有较大的影响,尤其其发病期一般又在盛花期,会大幅度消减农作物的产量,使农业经济遭受巨大损失。核盘菌分泌草酸作为其主要的致毒因子,在核盘菌与植物互作过程中,草酸扮演着多方面的角色。草酸氧化酶能够提高植物对菌核病和外援草酸的抗性已经获得了很多方面的研究证据的支持。其能够氧化草酸,生成过氧化氢和二氧化碳,降低草酸毒性。虽然目前通过基因工程技术,将草酸氧化酶转入其他作物提高抗菌核病的报道很多,但对于核盘菌与宿主的互作机制依然没有突破。在研究草酸导致宿主细胞程序性死亡的关联的过程中,发现草酸能够诱导植物细胞ROS水平的升高,当ROS水平被抑制时,细胞凋亡现象也随之消失。相反的,草酸缺陷性非致病菌不能够改变宿主细胞氧化还原水平。植物体自身存在有抗氧化酶系统如SOD,CAT,POD等,能够及时清除体内的氧自由基,保护细胞免受氧化损伤。而当前的报道主要集中核盘菌与宿主植物互作过程中的信号通路,对核盘菌与宿主互作过程中对氧化酶系的影响报道较少,因此本实验选择对核盘菌与拟南芥互作过程中对抗氧化酶的影响进行研究。本实验通过农杆菌浸花法将草酸氧化酶转入模式植物拟南芥中,并筛选得到能够稳定遗传的,拥有草酸盐化酶活性的和有良好抗病性的转基因T4代拟南芥。通过使用核盘菌,草酸,草酸钠,盐酸等不同的处理条件,对比野生型拟南芥和转基因拟南芥抗氧化酶系统SOD、POD、CAT的表达和酶活性所造成的影响。并且通过使用去除草酸的菌液感染拟南芥,研究了核盘菌致病对草酸的依赖程度。本实验通过Gus组织染色和DNA验证,获得了纯合转基因拟南芥植株,并鉴定具有良好的抗菌核病性。并获得如下三个结论:1)本实验通过对不同的处理条件下的野生和转基因拟南芥叶片SOD、CAT、POD的基因表达量的荧光定量分析和对其酶活力的检测分析,表明核盘菌感染拟南芥的时候或使用外源草酸处理拟南芥叶片时,会抑制SOD,CAT酶的表达量和活性,但对POD有促进作用。2)本实验表明草酸氧化酶能够减轻核盘菌或外加草酸对SOD、CAT酶的抑制作用,但并不能够影响HCl对它们的影响,这表明草酸氧化酶是通过降解草酸或草酸盐来发挥作用的。3)本实验通过是使用HCl代替菌液中的草酸,成功使拟南芥致病产生与对照组相同的病斑,表明核盘菌致病能力是与其酸性的密切相关,可以使用HCl来代替草酸是核盘菌的致病能力得以恢复。
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