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细菌原生质体融合是一个随机的过程,通过标记双亲本菌株来筛选阳性融合子。本试验利用了亲本菌株在培养特性及耐药性两方面存在的差异,标记亲本菌株对融合菌株进行筛选。通过药敏纸片试验和最低抑菌浓度试验(MIC)筛选出两亲本菌株鸭源沙门氏菌(S6)和鸭源巴氏杆菌(CBa),确定亲本菌株药物标记,药敏试验结果表明鸭源沙门氏菌(S6)对壮观霉素敏感,抑菌圈为26 mm,鸭源巴氏杆菌(CBa)对壮观霉素耐药,抑菌圈为0mm。通过测定最低抑菌浓度(MIC),确定32 μg/ml的壮观霉素作为选择培养基的抗生素浓度。壮观霉素应用浓度试验结果表明,在含32μg/ml壮观霉素的麦康凯培养基中S6完全不能生长,在含32μg/ml的新霉素的血琼脂培养基中CBa能良好生长。筛选出的亲本菌株通过紫外分光光度计测量OD600值绘制CBa和S6的生长曲线,确定原生质体制备时间：CBa为12-14 h,S6为14-16 h。在溶菌酶的作用下制备原生质体,确定制备CBa原生质体的最佳溶菌酶浓度为3 g/L,可得到95.25%的原生质体制备率以及33.52%的再生率；制备S6原生质体的最佳溶菌酶浓度为2.5g/L,可得到95.32%的原生质体制备率以及32.19%的再生率。通过聚乙二醇(PEG)法进行原生质体融合,利用抗药性结合培养条件对融合子进行筛选,再对融合菌株进行培养特性、菌落形态、菌体形态、血清学试验、稳定性检测等初步鉴定最终得到5株能够在32μg/ml壮观霉素的麦康凯平板上稳定遗传的融合菌株。所得融合子进行血清学试验均能凝集双亲菌株阳性血清,菌体形态为中等大小两端顿圆的革兰氏阴性杆菌,能够在麦康凯培养基长出圆形淡黄色菌落,生化试验结果表明氧化酶为阳性,吲哚、枸橼酸钠、蔗糖、乳糖、侧金盏花、硫化氢、氰化钾均为阴性。根据CBa的外膜蛋白H (OmpH)基因和S6的外膜蛋白A (OmpA)基因的保守区域设计两对引物。利用双重PCR法检测5株融合菌株,结果表明3株能够同时检测到双亲本的基因,其余2株则只能检测到单一亲本基因,双重PCR产物测序结果表明与亲本菌株同源性为100%。