猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测与流行病学研究

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)是目前造成养猪业严重经济损失的重要病原。在临床上可引起怀孕母猪流产、早产、产死胎、弱胎及断奶仔猪肺炎、生长迟缓,且常伴发细菌混合感染。PRRSV属于动脉炎病毒科,为单股、正链RNA病毒。血清型分为欧洲型和美洲型。美洲型PRRSV基因组具有高度的变异性,具有多种基因亚型。该病在我国自1996年首次报道以来,已广泛流行于全国各省,但对PRRSV感染流行病学和基因变异研究尚少有报道。本研究主要包括以下几方面内容: 1、PRRSV RT-PCR检测方法的建立:运用3对分别针对PRRSV的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果为:3对引物对PRRSV均有很高的特异性,与HCV、PPV、PRV、PCV2和SIV均不发生特异性反应;N1/N2引物PCR病毒最低检测量为7.9 TCID50、而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TCID50;应用3对不同的引物同时检测48份临床样品,N1/N2引物的阳性数为28份,而AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物阳性数分别为27份和25份,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374bp的目的基因片段。该结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。 2、PRRSV流行病学研究:应用N1/N2引物,通过RT-PCR方法对2002年5月至2005年2月来自江苏、上海、浙江、安徽、山东、广西、江西和河南省129家猪场的271份临床病料进行了PRRSV检测,共鉴定出166份PRRSV阳性病料,分别来自85家猪场。以病料统计,阳性率为61.2%(166/271),其中安徽、江苏和上海的阳性率较高,2002年至2005年PRRSV阳性率分别为:74.4%、65.6%、57.0%和38.1%。通过问卷调查的方式收集了每份送检病料流行病学方面的数据,结果显示,大约70%的病料送检于秋冬两季;超过90%的病例表现为呼吸道症状或繁殖-呼吸道症状,有6.6%%病例只表现为母猪繁殖障碍;病理变化主要表现为淋巴结水肿、出血(100%)和弥漫性肺炎(约占88.0%),还有部分表现为肠壁变薄、脾脏轻度出血、
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