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目的: 肝纤维化前期的研究表明与肝星状细胞的激活有关，现在表明上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)也起着非常重要的作用。EMT表现为上皮标志的蛋白标志物降低和间皮标志蛋白标志物的表达升高。microRNA是一类含25个核苷酸左右的非编码RNA，通过调节基因表达与靶基因的mRNA的3-非翻译区(3-UTR)特异性结合后，抑制其转录和翻译，在多种生物过程中发挥重要作用。肝卵圆细胞（Hepatic oval cell，HOC）是肝脏的原始兼性多能干细胞，肝卵圆细胞具备极强的体外增殖和分化能力，在肝脏严重损伤或者肝脏受到肝毒性物质损伤时候，这时候卵圆细胞的增殖与分化来完成肝再生。本研究的目的是探讨miR-21在大鼠肝卵圆细胞(WB-F344) EMT中的作用和机理。 方法： 1.TGF-β1对大鼠肝卵圆细胞EMT的作用 用10ng/ml TGF-β1刺激HOC1、3、5、7天后，显微镜下观察细胞形态的变化，western blot检测上皮标志蛋白E-cadherin和间皮标志蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达。 2.TGF-β1刺激miR-21的表达 用10ng/ml TGF-β1刺激HOC5天后，实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况。 3.MiR-21介导了TGF-β1对HOC的EMT作用 转染100 MOI miR-21抑制慢病毒(anti-miR-21)抑制miR-21的表达后，用实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况。建立稳定的miR-21抑制慢病毒细胞株后，用TGF-β1刺激HOC5天，western blot检测检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。 4.MiR-21对大鼠肝卵圆细胞EMT的作用 用100 MOI miR-21增强慢病毒(pre-miR-21)转染HOC，用实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况。建立稳定的miR-21增强慢病毒细胞株后，用TGF-β1刺激HOC5天，western blot检测检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。 5.RECK介导了大鼠肝卵圆细胞的EMT (1) TGF-β1刺激细胞后，westem blot检测蛋白RECK。 (2)用TGF-β1刺激已转染终浓度为100 MOI的miR-21抑制慢病毒的细胞5天后，用western blot检测PTEN的表达量。 (3)转染终浓度为100 MOI的miR-21增强慢病毒4天后，用western blot检测RECK的表达量 (4)用RECK siRNA转染大鼠肝卵圆细胞后，TGF-β1刺激细胞5天。用westemblot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。 (5)用RECK siRNA转染大鼠肝卵圆细胞后，miR-21增强慢病毒转染HOC。用western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。 结果： 1.TGF-β1的刺激引起大鼠肝卵圆细胞发生EMT (1)TGF-β1刺激细胞形态发生改变，由原先卵圆形变为细梭形样的成纤维细胞状细胞。 (2)TGF-β1刺激引起了上皮标志蛋白(E-钙粘蛋白)表达下降。 (3)TGF-β1刺激引起了间质标志蛋白（N-钙粘蛋白、波形蛋白）表达上升。 2.TGF-β1刺激大鼠肝卵圆细胞miR-21的表达:在TGF-β1刺激5天后miR-21的表达明显上升。 3.MiR-21介导了TGF-β1对HOC的致EMT作用。 (1)转染miR-21抑制慢病毒稳定细胞株后，miR-21的表达明显下降。 (2)上皮标志蛋白（E-钙粘蛋白）较对照组表达升高。 (3)间质标志蛋白（N-钙粘蛋白、波形蛋白）表达较对照组表达下降。以上结果提示下调miR-21表达后，阻断了TGF-β1致HOC的EMT作用。4.miR-21转染直接刺激HOC发生EMT (1)转染miR-21增强慢病毒稳定细胞株后，miR-21的表达明显增高。 (2)miR-21增强转染组较对照组相比上皮标志蛋白（E-钙粘蛋白）表达下降。 (3)miR-21增强转染组较对照组相比间质标志蛋白(N-钙粘蛋白、波形蛋白)表达较对照组升高。以上结果提示miR-21过表达可直接刺激HOC发生EMT 5.RECK介导了HOC的EMT (1)TGF-β1调节了RECK蛋白的表达:TGF-β1刺激细胞后RECK表达下降。 (2)miR-21调节了PTEN蛋白的表达:TGF-β1+anti-miR-21组较单纯TGF-β1组RECK表达上升，Pre-miR-21组较阴性对照组RECK表达下降。 (3)抑制RECK增加了TGF-β1的EMT作用:RECK siRNA+TGF-β1组较TGF-β1组上皮标志蛋白(E-钙粘蛋白)表达降低，间质标志蛋白N-钙粘蛋白、波形蛋白）表达升高。 (4)抑制RECK增加了miR-21的EMT作用:RECK siRNA+miR-21增强组较miR-21增强组上皮标志蛋白(E-钙粘蛋白)表达降低，间质标志蛋白（N-钙粘蛋白、波形蛋白）表达升高。 结论： MiR-21通过RECK调节了HOC的上皮间质转化。