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香菇产业是我国食用菌产业经济的重要支柱之一,在调整农村经济结构与产业结构,促进农村经济发展中发挥着重要作用。我国是香菇生产大国,但不是香菇生产强国,育种工作不能满足产业发展的需求。因此,育种工作迫在眉睫。本文利用YJ-01等23个香菇品种,通过原生质体诱变与单孢杂交进行选育,以期得到高产优质的香菇菌株。主要研究结果如下:1.确定了香菇菌株YJ-01原生质体制备的最适条件:以0.5 mol/L Mg SO4作为稳渗剂,在p H=5.0的条件下,利用混合酶(1%蜗牛酶+1%纤维素酶),在27.9℃条件下酶解5 d龄菌丝体2 h,原生质体产量最高。2.确定了香菇菌株YJ-01原生质体再生的最适条件:以0.5 mol/L蔗糖作为稳渗剂,在p H=5.5的条件下,利用混合酶(1%蜗牛酶+1%纤维素酶),在27.8℃条件下酶解6.5 d龄菌丝体2.9 h,原生质体再生率最高。3.通过原生质体紫外诱变获得547株再生菌株。(1)利用不同栽培料进行筛选,得到17株优良再生菌株。其中,菌株Y209最适于苹果木屑上生长,菌丝生长指数(79.88)是YJ-01的3.56倍;菌株Y72最适生长于沙柳木屑,生长指数(70.63)是YJ-01的3.67倍;菌株Y369最适宜生长于杨桐木屑,培养43d后的连接料量(338.24 g),是YJ-01的2.76倍。(2)对17株优良再生菌株进行连续传代培养与液体出菇检测。结果表明:菌株Y150的菌丝生长性能最稳定;菌株Y440,Y365,Y314,Y243和Y283能够在液体培养基中形成原基。(3)对17株优良再生菌株进行酯酶同工酶与RAPD鉴定。结果表明:菌株Y263,Y440,Y314,Y454,Y381,Y317,Y211,Y150和Y463为变异菌株。其中,菌株Y440和Y314表现最为突出。4.收集香菇品种23个,对18个品种进行单孢分离得到1166株单核菌株。通过7个杂交方案,经单孢杂交得到杂交菌株1367株。(1)对9608-1和808-1的杂交的238株杂交经菌丝生长性能筛选,得到18株优良菌株(B80D111,B80D20,B46D111,B10D175,B6D178,B80D51,B70D21,B6D125,B60D111,B81D111,B60D99,B10D167,B9D176,B76D20,B6D149,B27D21,B81D99和B46D20)。其中,B60D111在杨桐木屑上表现最优,培养43 d后的连接料量为261.54 g,分别是9608-1的1.29倍、808-1的1.60倍。B70D184在PDA平板上表现最优,生长指数(32.73)分别是808-1和9608-1的2.42倍和3.32倍。(2)对18株优良菌株进行连续传代培养与液体出菇性能鉴定。结果显示:菌株B6D178的菌丝生长性能最稳定。菌株B10D167和B10D175能够在液体培养基中形成原基。(3)对18株优良菌株进行酯酶同工酶与RAPD鉴定。结果显示:菌株B60D99,B6D149,B60D111,B27D21,B10D175,B10D167,B80D111,B80D51和B70D20与亲本条带具有明显差异。通过综合比较,确定菌株B10D175为优良杂交菌株(4)对其余1129株杂交菌株进行耐高温筛选。结果表明:高温处理后,有133株杂交菌株能恢复生长,其中F149B92,F`47B90和A59D97等20株杂交菌株能在35℃下生长;26株杂交菌株在高温处理后,经过6 d 25℃恢复,长势依旧较好,其中F149B92长势最优。