【摘 要】
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该文初步研究了嗜酸乳杆菌的生物学特性及其产生的细菌素分离、纯化、鉴定和部分特性.初步研究了采用硫酸铵盐析粗提嗜酸乳杆菌素的方法,确定的提取条件为:培养液于75℃下保
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该文初步研究了嗜酸乳杆菌的生物学特性及其产生的细菌素分离、纯化、鉴定和部分特性.初步研究了采用硫酸铵盐析粗提嗜酸乳杆菌素的方法,确定的提取条件为:培养液于75℃下保温25min,离心(7℃、7000×g、15min)取上清液,用10％NaOH将pH值调至8,缓慢加入硫酸铵至饱和度为80％,磁力搅拌2小时,离心(7℃、10000×g、20min),沉淀悬浮于无菌水中,采用截留分子量为1000的透析袋透析.为了进一步鉴定细菌素采用了SDS-PAGE,确定的电泳条件为:分离胶浓度16.5％,交联度6％,6M尿素;浓缩胶浓度5％,交联度3％;恒流电流20mA,起始电压140~160V,逐渐升至180~200V;培养液浓缩100倍上样量为10μl .得到的细菌素经SDS-PAGE显示出单带,L.acidophilus ND产生的细菌素分子量略小于3.5KDa,而L.Acidophilus WS产生的细菌素约为3.5KDa,对金黄色葡萄球菌具有抗性.通过单因子试验研究了影响两株嗜酸乳杆菌产生细菌素的因素,结果表明:①蛋白胨的种类对嗜酸乳杆菌产生细菌素有较大影响,采用鱼蛋白胨配制成的MRS液体培养基培养L.acidophilus时,L.acidophilus生长极为缓慢,说明该蛋白胨不适合于L.acidophilus的生长和产生细菌素;以干酪素为氮源制作MRS培养基培养L.acidophilus时,其代谢产物中含有大量的蛋白质,而且有很大一部分来源于培养基,产物难以提纯;采用动物蛋白胨配制成MRS液体培养基培养L.acidophilus时,其代谢产物中含有的蛋白类物质比较单纯,SDS-PAGE表明L.acidophilus分泌到胞外的蛋白种类少,易于提纯.②培养时间对嗜酸乳杆菌产生细菌素的影响不太大,L.acidophilusND培养18小时后收获时蛋白类物质含量最大,L.acidophilusWS培养15小时后收获时蛋白类物质含量最大,但培养45小时后仍然有较大量的蛋白质类物质,但中间有一段时间20~30小时内蛋白质较少.
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