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目的:癫痫是神经内科的常见病,严重的影响患者的工作能力和生活质量。癫痫是大脑神经元突发性的异常放电,导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病。由于异常放电神经元所涉及的部位不同,可表现为发作的运动、感觉、植物神经、意识及精神障碍。它是多种原因引起的临床常见的症状之一。据国内流行病学调查,其发病率约为人群的5%,患病率约为人群的6%～7%。但在所有患者中大约有30%-40%都属于神经内科难治性的癫痫,其中50%适用于外科手术治疗,因其发生的机制仍不十分清楚。本课题通过对小鼠模型的研究,采用的方法有二:(1)观察化痰清热法所产生的急性毒性反应和死亡情况。(2)通过化痰清热法对青霉素诱导小鼠癫痫模型的行为和脑电图;青霉素诱导小鼠的癫痫模型在脑组织中的γ-氨基丁酸(GABA)浓度、谷氨酸脱羧酶(GAD)活性在癫痫的疾病发生过程中有密切的关系。探讨化痰清热法具有抗癫痫作用.方法:1.动物模型建立与评定:选用健康的昆明小鼠是由湖北省实验动物研究中心提供,体重20±2g,雄性小鼠40只,自由饮食3d后。2.药物:化痰清热方是由鲜竹沥、石菖蒲、当归、远志等药物组成的纯中药粉剂。3.分组及处理:将40只雄性小鼠,随机分4组,每组10只,分别为将该方浓缩为含生药的中药制剂,把它制成浓缩液大、小剂量组、苯巴比妥钠组、生理盐水组。中药大、小剂量组各灌胃7 d(0.4ml/只);苯巴比妥钠组(0.2mg/只)、生理盐水组各注射腹腔7 d(0.25m g/只)。各组动物均在早上8:30分分别灌胃及腹腔注射,在8小时后均腹腔注射东莨菪碱(1 mg/kg)30min以拮抗其外周胆碱能反应;用青霉素400万U/kg致痫;在成功造模及用药物治疗后。参照Racine标准分级:分别检测脑电图和观察痫性发作行为.分级:0级,无抽搐,行为正常;Ⅰ级,节律性嘴或面部抽动;Ⅱ级,点头或甩尾;Ⅲ级,单肢抽动;Ⅳ级,多肢抽动或强直;Ⅴ级,全面性强直并伴有阵挛发作。当小鼠持续性癫痫发作并连续在6小时发作内出现3级以上即为模型成功。4.指标检测:①对癫痫组30只随机抽出6只,分别为中药大剂量组、小剂量组、苯巴比妥钠组;同时描记脑电图。用橡皮套套住鼠的4只脚,固定在木板上,再用细麻绳套住鼠牙以固定头部。用2根电极,1根插入顶部头皮下,1根插入同侧耳后皮下,在日本光电5210型10导脑电图机上描记脑电活动5min。②脑组织标本采集:取脑组织在电子天平上称重,按1:10(W:V)加入预冷的脑组织匀浆液,在超声匀浆器中破碎(15 s×3),在4℃低温离心机中15 000×g离心20 min,取上清液,置-20℃冰箱保存,3 d内进行GABA浓度和GAD活性检测。③脑组织匀浆制备:取脑组织在电子天平上称重,按1:10(W:V)加入预冷的脑组织匀浆液,在超声匀浆器中破碎(15 s×3),在4℃低温离心机中15 000×g离心20 min,取上清液,置-20℃冰箱保存,3 d内进行GABA浓度和GAD活性检测。④脑组织GABA浓度测定:按Chen等建立的高效液相色谱法进行检测。⑤GAD活性测定:酶反应条件按Wolf等建立的方法进行。计算方法:将同一样品GAD反应后的GABA浓度减去反应前GABA浓度,就是每克脑组织所含GAD的活性,即每克脑组织在20 min内反应所生成的GABA的量(μmol/g)。结果:造模过程中癫痫发作的情况:(1)四组造模小鼠在在8小时后均腹腔注射东莨菪碱(1 mg/kg)3 0min后,用青霉素4 00万U/kg致痫,分别观察记录小鼠出现不同级别的癫痫发作。(2)化痰清热法对青霉素钠诱导小鼠癫痫发作的影响:化痰清热浓缩液中药大剂量组高于苯巴比妥钠干预组,有显著性的意义(p＜0.05),而化痰清热浓缩液中药小剂量组高于对照组,有比较显著性的差异(p＜0.05)。因此说明化痰清热方及苯巴比妥钠都具有抗癫痫的作用。(3)化痰清热方对青霉素钠诱导小鼠癫痫发作级别的影响:在苯巴比妥钠腹腔注射7天后,用东莨菪碱和青霉素诱导的小鼠癫痫发作级别较中药大剂量组显著降低(p＜0.05),说明苯巴比妥钠抗癫痫干预起效比较快。当化痰清热方的大、小剂量组给药7天后比对照组有显著性的差异(p＜0.05),说明化痰清热法中药小剂量组及苯巴比妥钠干预组都均有降低癫痫发作级别的作用。(4)化痰清热法对青霉素钠诱导小鼠颞区γ-氨基丁酸的影响:正常组与中药小剂量组颞区的GABA相比均显著的降低(p＜0.05),结果表明颞区脑组织GABA浓度升高是由于GAD活性增强所致,可能是癫痫发作后GABA能神经元介入的抑制功能代偿性增加的结果,为机体内源性抗癫痫机制增强的一种反应。当用荧光检测方法也发现前脑皮层GAD活性明显增高,且持时间较长。在临床检测方面,侯国庆等收集未进行抗癫痫药物治疗的、24 h内未发作的癫痫患者的脑脊液,采用酶化学反应结合荧光薄层扫描方法,发现癫痫患者脑脊液中GAD活性明显增强,病程长于3年的患者尤为显著。这些结果和本实验结果一致,亦认为GAD活性增加是机体的一种代偿性反应。而在苯巴比妥钠干预组,说明用药物能预防降低小鼠癫痫发作的机制。结论:1.化痰清热法对青霉素诱导小鼠癫痫发作有明显的拮抗作用,其作用机理可能是通过苯巴比妥钠干预组来降低癫痫发作实现的。2.本实验结果为临床上应用抗化痰清热法对治疗癫痫提供了科学的实验依据。