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猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是猪病毒性腹泻的主要病原,不同年龄段的猪(尤其是仔猪)均易感,猪感染后以腹泻、脱水、呕吐为主要临床特征,PEDV和TGEV已成为降低仔猪成活率的重要原因之一,对世界各国的养猪业造成了非常严重的经济损失。为了解陕西省PEDV和TGEV的流行病学及病原学特征,明确陕西省的流行毒株与疫苗株、经典毒株和国内外流行毒株的亲缘关系及变异情况,进而为陕西省综合防控PEDV和TGEV及研发更加合理有效的疫苗提供理论依据及参考数据,本研究拟对陕西省部分地区进行PEDV和TGEV的流行病学调查,并对这两种病毒的遗传变异情况进行分析。研究取得如下结果。1.利用PCR法检测了714份腹泻病料中的PEDV。结果显示,检测出PEDV阳性病料288份,PEDV的阳性率为40.33%。在西安、咸阳、渭南、宝鸡地区病料中均检测到了PEDV,其中西安地区病料中PEDV阳性率最高,为46.94%。不同季节采集的病料中均检测到了PEDV,其中冬季病料中PEDV阳性率最高,为57.96%。采集不同生长时期猪群的病料中也均检测出了PEDV,其中哺乳仔猪的PEDV阳性率最高,为70.42%。2.利用PCR法检测714份腹泻病料中的TGEV。结果显示,检测出TGEV阳性病料69份,TGEV阳性率为9.97%,其中PEDV与TGEV混合感染的阳性病料20份,PEDV与TGEV混合感染阳性率为2.81%。在西安、咸阳、渭南、宝鸡地区病料中均检测到了TGEV,其中咸阳地区病料中TGEV的阳性率最高,为14.34%。不同季节采集的病料中均检测出了TGEV,其中冬季病料中TGEV的阳性率最高,为17.05%。采集哺乳仔猪、断奶仔猪、育肥猪、经产母猪的病料中均检测出了TGEV,阳性率分别为15.88%、8.52%、4.45%、7.29%,而后备母猪和种公猪中未检测到TGEV。3.将处理好的PEDV阳性病料接种Vero细胞进行病毒的分离,通过细胞病变观察、PCR、电镜观察等方法鉴定病毒。结果表明,该病毒能使细胞变圆、皱缩,继而出现细胞破碎、脱落、拉丝等病变,经PCR和电镜观察鉴定为PEDV,并命名为PEDV-SX株。以疫苗株CV777的基因组序列为模板,利用Primer 5.0设计了15对相互重叠的引物,进行全基因组的扩增及测序。利用DNA star软件中的SeqMan软件对序列进行拼接,并用MegAlign软件对目的基因进行同源性的比较和遗传进化分析。结果表明,PEDV-SX株与疫苗株的同源性为98%,与经典毒株的同源性为97.8%,与国内外流行株的同源性为97.2%~99.9%。PEDV-SX株与2012中国山东分离的SD-M株和2008年中国江苏分离的JS2008株处在系统发育树的同一个分支上。4.通过对TGEV-SX株的S、M、N、E基因进行分子克隆和测序,成功获得了S、M、N、E基因序列。利用DNA star软件中的MegAlign软件对目的基因进行同源性比较和遗传进化分析。结果表明,TGEV-SX株的S、M、N、E基因与8株参考毒株的同源性分别为98.0%~99.5%、98.1%~100%、97.9%~99.8%、96.8%~99.2%。TGEVSX株的S基因与SC-Y株、SHXB株、virulent Purdue株、Purdue P115株同属一个大的分支,而TGEV-SX株的M、N、E基因与Miller M6株、Miller M60株、H16株、TS株同属一个大的分支。本研究发现在陕西省部分地区猪群中均有PEDV与TGEV感染,PEDV的感染率较高,且主要感染哺乳仔猪,并存在二者混合感染。同源性分析及遗传进化分析发现,PEDV-SX株与2012中国山东分离的SD-M株和2008年中国江苏分离的JS2008株的亲缘关系较近,而与疫苗株CV777亲缘关系较远。同时也发现TGEV-SX株S基因与SC-Y株、SHXB株、virulent Purdue株、Purdue P115株亲缘关系较近,而TGEVSX株的M、N、E基因与H16、TS株、Miller株亲缘关系较近。