猪德尔塔冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是近年新发现的一种引起猪只急性腹泻、脱水甚至死亡的冠状病毒。当前,PDCoV已蔓延至世界主要养猪国家,因尚未有特效治疗药物和预防用疫苗,给全球养猪业造成了严重的损失。天然免疫是机体抵抗微生物感染的第一道防线,宿主通过天然免疫应答上调干扰素刺激基因（Interferon-stimulated Genes,ISGs）来激活细胞产生抗病毒因子抵御病毒入侵。ISG15是最早产生且表达量最高的ISGs之一,可诱导宿主细胞产生I型干扰素和其他抗病毒因子,对许多病毒的复制和装配具有负调控作用。然而,ISG15在PDCoV感染过程中的作用及其对病毒复制的作用目前尚不清楚。本研究探索ISG15对PDCoV复制的影响,主要研究内容和结果如下:1.本研究分别构建了LLC-PK1细胞ISG15稳定过表达和沉默细胞系。通过设计ISG15的过表达引物,成功构建pcDNA3.1-m Cherry-ISG15过表达载体,转染LLC-PK1细胞后利用遗传霉素（G418）筛选出了稳定过表达ISG15的重组细胞系LLC-PK1-ISG15-OE,其ISG15表达量比正常细胞提高12倍（P<0.001）。同时,还设计3条sh RNA干扰序列,以pcDNA3.1-Double U6为载体成功构建针对猪ISG15基因的重组载体pcDNA3.1-Double U6-XK1-BE2、pcDNA3.1-Double U6-XK1-BE3和pcDNA3.1-Double U6-XK2-BE3;将重组载体分别转染至LLC-PK1细胞内,并筛选出稳定沉默ISG15的重组LLC-PK1细胞系;经RT-PCR、RT-q PCR和WB等方法筛选出沉默效果最好的重组细胞系LLC-PK1-ISG15-KD-3,其ISG15表达量仅为正常细胞ISG15表达量的0.33倍（P<0.001）。2.探究了ISG15对PDCoV复制的影响。结果表明,在LLC-PK1细胞接毒后的30 h内,ISG15表达量随着病毒感染时间逐渐增加,到30 h时上升甚至达到2164倍,但30 h后ISG15的表达量骤减;ISG15表达量随着感染量逐渐增加,但感染量增至2MOI后,ISG15表达量骤减。在稳定过表达ISG15的LLC-PK1细胞中PDCoV的复制被显著抑制（P<0.01或P<0.001）,在接毒后6、12、18、24h时,过表达细胞系中PDCoV m RNA的表达量分别为正常细胞系的0.698（students’t test,P<0.001）、0.628（P<0.001）、0.643（P<0.001）和0.580倍（P<0.001）;在沉默ISG15的重组细胞系中的复制被显著促进（P<0.01或P<0.001）,在接毒后6、12、18、24h时,沉默细胞系中PDCoV m RNA的表达量分别为正常细胞系的2.913（P<0.001）、2.848（P<0.001）、2.919（P<0.001）和2.897倍（P<0.001）;IFA和WB检测结果也证实一致的变化趋势。综上试验结果证明,ISG15具有抑制PDCoV复制的作用,研究结果将为阐明PDCoV与ISG15相互作用及抗病毒研究提供实验基础和新的思路。