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肠道微生物区系在哺乳动物的健康和疾病中起着十分重要的作用,随着工农业生产的不断发展,少量的、通过饮水或食物给予的抗菌药物会残留在动物制品中。这些残留的抗菌药有可能通过饮食进入人体,改变人体肠道菌群的生态平衡。因此,一些国际组织,如联合国粮食及农业组织(Food and Agriculture Organization)/世界卫生组织(world health organization)对于残留的动物抗菌药对人体肠道菌群的安全性评价给予了一些指导方针和建议,并由此制定某些抗菌药的最高日允许摄人量(acceptable daily intake,简称ADI)。我国现在还没有制定出残留的动物抗菌药对人体肠道菌群的安全性评价的规程,现在的ADI是参照JECFA的标准而设定。现行的ADI是否是安全的,以及如何制定我国的抗菌药残留安全性评价的规程迫在眉睫。常规的检测方法都是建立在活菌计数基础之上的,由于培养方法在肠道微生物分离培养上的局限性,大量研究者开始转向运用分子指纹图谱技术分析肠道微生物区系。基于16S r RNA基因(16S ribosomal RNA gene,简称16S r DNA)的变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,简称DGGE)技术具有直观、快速的优点,适合于分析复杂的微生物菌群。本研究选用兽医临床上被广泛应用的恩诺沙星,应用DGGE技术结合活菌计数方法分析其残留剂量对SPF小鼠肠道微生物区系中菌群的数量、耐药率、多样性以及定植抗力的影响。实验分为两组:第一组目的:使用DGGE技术结合活菌计数方法分析残留剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道微生物区系中菌群的数量、耐药率以及多样性的影响。方法:雌性SPF级KM小鼠适应性饲养7d,通过口服恩诺沙星水溶液35d,随后自然恢复21d。使用DGGE技术结合活菌计数方法分析整个实验周期内SPF小鼠肠道微生物区系中菌群的数量、耐药率以及多样性的变化。结果:使用16S r DNA的V3区(variable regions)的通用引物对细菌微生物区系的DGGE分析表明,极低剂量组(0.03mg/L)中,用药以后小鼠肠道菌群多样性与未给药时一致性好,SPSS13.0分析结果表明无显著差异;低剂量组(0.3mg/L)中,SPSS13.0分析结果表明,此剂量的恩诺沙星使用以后对小鼠肠道菌群的E值(Evenness,均匀度)产生了影响(P＜0.05);中剂量组(3mg/L)、高剂量组(30mg/L)中,SPSS13.0分析结果表明小鼠肠道菌群多样性与未给药时差异显著(P＜0.05)。活菌计数结果显示高剂量组(P＜0.01)、中剂量组(P＜0.05)的总需氧菌,高剂量组(P＜0.01)的肠杆菌数量在给药后期有所减少。高剂量组(P＜0.01)、中剂量组(P＜9.01)总需氧菌、总厌氧菌的耐药率增大。第二组目的:使用活菌计数方法分析残留剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道微生物区系中定植抗力的影响。方法:雌性SPF级KM小鼠适应性饲养7d,通过口服恩诺沙星水溶液35d,在第11d、12d两次口服灌胃C.albicans SC5314,随后自然恢复21d。使用活菌计数方法分析整个实验周期内SPF小鼠肠道微生物区系定植抗力的变化。结果:SPSS13.0分析结果表明高剂量组、中剂量组小鼠肠道微生物区系的定植抗力即对外源性C.albicans SC5314的清除能力减弱(P＜0.05)。本研究使用PCR-DGGE结合活菌计数方法应用于抗菌药残留微生物安全性评价,研究了不同残留剂量恩诺沙星对肠道菌群数量、耐药率以及多样性的影响。结果显示PCR-DGGE方法是一种比活菌计数敏感的实验方法,应用于抗菌药残留微生物安全性评价具有一定的可行性;同时显示中国现行规定的恩诺沙星的ADI可能会对人体肠道菌群的多样性产生影响。