补泻同施、调节平衡法对2型糖尿病胰岛细胞修复的临床观察及实验研究

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根据“补泻同施,调节平衡”的治疗方法,将具有“益气养阴,补肾健脾,润肺清胃,化瘀通络”功效的经验方黄地吉仙汤应用于临床2型糖尿病的治疗,验证由导师宁亚功教授提出的“补泻同施,调节平衡”疗法对2型糖尿病的治疗效应,为临床治疗糖尿病提供新的思路和方法。此外对2型糖尿病大鼠进行实验研究,为进一步探索“补泻同施,调节平衡”疗法的作用机制提供实验依据。第一部分补泻同施、调节平衡法对2型糖尿病胰岛细胞修复的临床观察目的:探讨“补泻同施,调节平衡”疗法对2型糖尿病β细胞修复的作用,为临床治疗2型糖尿病寻找有效方法。方法:将符合入选标准的2型糖尿病患者60例,采用简单随机的方法将受试者分为2组,对照组和治疗组各30例。在相同的饮食和运动指导的基础上,对照组予口服二甲双胍片治疗,治疗组给予黄地吉仙汤治疗。2组均观察12周。测定两组治疗前后的空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、空腹C肽、体重、体重指数、稳态模型胰岛素抵抗指数、稳态模型β细胞功能指数、肝肾功能安全性指标。并收集对应时间段的临床症状进行积分。采用SPSS18.0对结果进行统计分析,进行前后对照及组间对照,分析研究生化指标的变化情况和意义以及临床症状的改善情况。结果:(1)治疗前两组一般情况对比,两组患者性别、年龄、病程、体重、体重指数、FPG、血压均没有统计学差异(P>0.05),可知两组资料具有可比性。(2)治疗后,两组患者的体重、体重指数都有明显的降低(P<0.01),两组相比,不具有统计学差异(P>0.05)。(3)治疗后,两组患者空腹血糖有显著降低(P<0.01),两组之间相比没有显著差异(P>0.05)。(4)治疗后,与治疗前相比,两组均能显著降低空腹胰岛素水平(P<0.01),并能显著升高空腹C-肽水平(P<0.01)。两组间比较无显著差异(P>0.05)。(5)治疗后,两组HOMA-IR、ISI与治疗前相比均有显著降低,有统计学意义(P<0.01)。治疗后两组间比较,无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组HOMA-β与治疗前相比均明显升高,有显著统计学意义(P<0.01),治疗后两组间比较无统计学意义(P>0.05)。(6)治疗后,两组中ALT、AST、r-GT等肝功能指标较前均有降低(P<0.05),两组间比较只有r-GT有差异(P<0.05),ALT、AST两组间无明显差异(P>0.05)。治疗后,两组中BUN、CR均无明显变化(P>0.05),两组间比较无明显差异(P>0.05)。(7)治疗后,两组症状积分均明显减少,与治疗前相比均有显著统计学差异(两组组内比较均出现P<0.01)。两组间比较,治疗组优于对照组,有显著统计学意义(P<0.01)。(8)治疗后,两组临床疗效比较,治疗组有效率比对照组有效率高,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄地吉仙汤能显著改善中医临床症状和改善2型糖尿病胰岛β细胞功能,提示其机制可能与降低血糖、改善胰岛素抵抗、减少胰岛细胞凋亡、修复胰岛细胞等有关。“补泻同施,调节平衡”疗法指导下组方的黄地吉仙汤有与二甲双胍相接近的降低血糖等方面的作用,且其临床症候疗效优于对照组。第二部分补泻同施、调节平衡法对2型糖尿病胰岛细胞修复的实验研究目的:研究在“补泻同施、调节平衡”治疗方法指导下组方的黄地吉仙汤对糖尿病大鼠胰岛细胞修复的影响,探讨黄地吉仙汤对减少胰岛细胞凋亡的作用靶点与作用机理,从而,揭示黄地吉仙汤的作用机制。证实黄地吉仙汤在实验室及临床上具有改善患者胰岛细胞凋亡及修复胰岛细胞的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠60只。设置正常组10只,余50只利用高糖高脂饲料+一次性小剂量腹腔注射STZ+精神紧张法诱发2型糖尿病大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、二甲双胍组各10只。各组给药8周后测定体重,检测FPG等指标;并取胰腺组织行HE染色和免疫组化染色观察。结果:(1)大鼠一般情况:正常组大鼠的一般情况最好,毛发光泽,活动自如,精神状态佳,饮食、饮水及大小便正常,无死亡;模型组大鼠的一般情况最差,毛发杂乱无光,精神状态萎靡,行动迟缓,并出现多饮多尿现象。其他各药物组在造模成功后一段时间内出现模型组上述情况,经给药治疗后均有不同程度改善。(2)体重:实验结束时,六组大鼠体重之间有显著差异,具有显著统计学意义(P<0.01)。进一步多重比较,正常组与其他五组比较均有显著统计学差异(P<0.01),其他各组之间无统计学差异(P>0.05)。(3)血清学指标:实验结束时,六组间大鼠血糖无统计学差异(P>0.05)。(4)HE染色显示各组大鼠胰岛形态:正常组大鼠胰岛丰富,团索状,呈类圆形,胞浆丰富,形态完整,胞核居中,细胞边界清晰。与正常组相比,模型组大鼠胰岛数目明显减少,细胞体积较大,形态不一,分布零散,边缘不齐,细胞之间边界不清,且细胞核呈偏心分布。与模型组相比,中药高剂量组与二甲双胍组胰岛形态明显改善。中药中剂量组与中药低剂量组改善不明显。(5)胰岛素免疫组化染色结果:阳性信号表现为细胞被染色成棕色颗粒。与正常组相比,模型组阳性细胞明显减少,各治疗组较模型组有不同程度改善。(6)六组大鼠胰腺组织中ki67的表达指数均小于1%,相比较而言,正常组、二甲双胍组及中药高剂量组的ki67的表达相对较多。结论:本实验成功诱导了2型糖尿病大鼠的模型,造模一次成功率为90%。HE染色及胰岛素免疫组化染色显示经中西药干预后,中药高剂量组、二甲双胍组的糖尿病大鼠胰岛细胞得到一定的改善,尤其是胰岛细胞分泌胰岛素的功能得到一定程度的修复。ki67免疫组化染色结果显示糖尿病并非肿瘤病变,细胞增殖的程度和数量均在正常范围。
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