【摘 要】
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嗜盐四联球菌CICC10469(Tetragenococcus halophilus)由本实验室从传统酱醪中分离而出。能有耐受0M~3.5M盐浓度,被广泛使用于高盐发酵中。外源吸收相容性溶质是嗜盐四联球菌
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嗜盐四联球菌CICC10469(Tetragenococcus halophilus)由本实验室从传统酱醪中分离而出。能有耐受0M~3.5M盐浓度,被广泛使用于高盐发酵中。外源吸收相容性溶质是嗜盐四联球菌应对盐胁迫的方法之一。But A转运系统是目前在嗜盐四联球菌中发现的单一转运甘氨酸甜菜碱的转运系统,属于二级甘氨酸甜菜碱转运系统,但目前对这一系统的研究并不深入。嗜盐四联球菌对于电转化的抗性使得在体内进行嗜盐机制的研究产生困难,因此我们转向体外研究。我们试图通过实时荧光定量PCR技术阐明嗜盐四联球菌but A基因在不同盐浓度下的表达情况,以及展示嗜盐四联球菌细胞膜在不同盐激情况下的通透性变化,同时构建多拷贝的but A完整表达盒载体,转化入相容性溶质转运系统缺陷型的大肠杆菌MKH13(Δ(pro P)2Δ(pro U)608[Spcr])中,通过功能互补验证but A基因的功能,并探究双拷贝but A完整表达盒对于大肠杆菌耐盐性的影响,我们也通过HPLC技术检测重组菌株胞内胞外甘氨酸甜菜碱的含量。q RT-PCR结果显示but A的相对表达量及细胞膜的通透性随盐浓度的增大而增大,同时含有单、双拷贝but A完整表达盒的菌株在高盐环境中能显示出典型的生长曲线,且耐盐情况有所差异。同时HPLC结果与生长曲线结果相一致。总之,研究结果表明but A的表达受到盐调控,双拷贝but A完整表达盒提高大肠杆菌MKH13的耐盐性,这表明多拷贝but A完整表达盒应用于嗜盐四联球菌基因工程改造以提高其耐盐性有一定的潜力,同时为嗜盐四联球菌的进一步研究和工业应用打下了良好基础。
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