质膜钙通道基因CNGC2在植物响应细菌AHL中功能分析及AHL诱导植物抗病的转录组分析

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N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)作为革兰氏阴性菌的群体感应信号分子,能够诱导植物的生理活动,调控植物的生长发育与抗病性等等。CNGC2作为拟南芥的质膜钙离子通道对于植物的生长发育等方面有着至关重要的作用。本研究通过植物生理学、分子生物学、细胞生物学等方面来探究CNGC2参与植物对3OC8-HSL的诱导响应,通过RNA测序的方法对3OC8-HSL诱导植物抗病性过程中拟南芥转录组的变化进行了分析,为新型生物农药的开发研究奠定理论基础,提供试验证据。本试验利用CNGC2的功能缺失突变体dnd1来探究AHL所诱导的植物生理变化是否与CNGC2有关。通过拟南芥的根长表型,抗病性、钙离子水平三个方面进行检测。结果发现3OC8-HSL处理拟南芥野生型能够显著的促进根长生长、增强植株抗病性、提高细胞钙离子水平;而dnd1型拟南芥则对3OC8-HSL的处理效应显示出不敏感或处理结果相反,这都说明CNGC2在植物响应细菌AHL过程中起着重要作用。之后我们利用qRT-PCR分析了AHL对植物CNGC2基因的表达影响,结果显示CNGC2基因能够被病原菌的侵染诱导显著上调表达,AHL本身虽不影响植物中CNGC2基因的表达,但能使植物处于一种待激发的状态,一旦发现病原菌的侵染,便能比未经过AHL处理的植物更加快速且剧烈和持久的上调CNGC2基因的表达水平,激活免疫系统,从而对病原菌做出响应,CNGC2基因在此过程中也起到了至关重要的作用。我们将3OC8-HSL是否进行处理作为条件,对两种条件下的拟南芥同时进行了软腐病菌EC1的侵染处理,选择即将发病但尚未发病阶段作为时间点在EC1侵染前后进行了取样,利用转录组测序对其进行了转录组学分析,再通过GO与KEGG两种数据库的差异表达基因分析与富集差异基因分析对差异基因具体功能和生物学类别进行归类,结果发现3OC8-HSL对植物基因组本身的调控作用有限,只有16个基因有显著差异,功能多集中在植物的生长发育中;而在致病菌侵染后,其基因显著差异达到了651个,这些基因中有大量的抗病相关基因表达为上调水平,大部分基因功能都集中分类在免疫与生物刺激响应方面,KEGG分析也发现差异基因主要集中在防御反应相关信号通路,结果表明3OC8-HSL通过激活植物自身免疫反应来增强植物抗病能力,这为以AHL为主体开发新型生物农药的研究提供了理论依据与试验材料。
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