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目的1.建立双尾彗星试验的优化条件和效果分析。2.研究男性不育患者精子浓度与精子DNA单双链损伤的关系,探讨少精症的发生机制。方法1.对双相单细胞凝胶电泳在中性和碱性电泳环境下的各个实验条件进行摸索,确定更加稳定、准确的试验方法。2.研究对象为120例男性不育患者,年龄25-40岁之间,根据世界卫生标准进行精液常规检测分析精子的浓度、活力等,利用双尾彗星试验分析精子DNA单双链损伤指数。结果1.通过优化双尾彗星试验的实验条件,我们选择双层琼脂糖凝胶作为试验用标本铺胶层数。碱性电泳缓冲液PH值调整为10.0以备后续试验使用。精子浓度调整为1×106/ml,同时中、碱性电泳时间各20min,电压为20V作为电泳最佳条件。2.120例男性不育患者根据精子浓度分为3个研究组,即组1(精子浓度<10×106ml-1)、组2(1O×106ml-1<精子浓度<20×106ml-1)和组3(精子浓度>20×106ml-1),每组40例。3组之间年龄、精子活力及精子畸形率没有统计学差异;组1精子DNA损伤指数(DFI)为(59.48±15.21)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(25.86±11.86)%,SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(43.31±13.72)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(31.93±10.21)%,DSB占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(53.85±10.27)%;组2精子DNA损伤指数(DFI)为(34.02±1.77)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(26.71±3.45)%,SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(78.59±9.78)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(8.37±3.04)%,DSB 占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(21.40±9.79)%;组3精子DNA损伤指数(DFI)为(20.77±2.43)%,单链损伤指数(SSB-DFI)为(20.44±2.39)%,SSB占所有损伤精子的比率(SSB-DFI/DFI)为(98.44±2.87)%,双链损伤指数(DSB-DFI)为(1.32±0.61)%,DSB 占所有损伤精子的比率(DSB-DFI/DFI)为(1.55±2.87)%。3组间SSB-DFI无显著差异(P>0.05),SSB-DFI/DFI在1组、2组和3组间随精子浓度升高而逐渐升高(P<0.05),DSB-DFI随精子浓度升高而逐渐下降(P<0.05),DSB-DFI/DFI随精子浓度升高而逐渐下降(P<0.05)。精子SSB-DFI及SSB-DFI/DFI与其他精液常规参数均无相关关系(P>0.05),精子DSB-DFI及DSB-DFI/DFI与精子浓度呈负相关(P<0.05)。结论1.优化后的双尾彗星试验,重复性好,稳定性高,利于标准化,能更好地检测精子DNA单双链损伤,对男性生殖能力的评估有更大的参考价值。2.精子DSB-DFI和DSB-DFI/DFI水平越高,精子浓度就越低,精子DNA双链损伤可能是精子浓度低的真正原因。