目的研究兔Epi-LASIK术后上皮瓣细胞形态结构、活性变化及其对早期角膜修复反应的影响,来探讨Epi-LASIK术后创伤愈合反应的特点。本研究分为二部分实验一兔Epi-LASIK术后上皮瓣细胞形态结构和活性的变化实验二兔Epi-LASIK术后上皮瓣保留对早期角膜创伤修复反应的影响方法实验一建立兔Epi-LASIK模型,随机分为1d、3d、5d、7d四组,并设立空白对照组。采用光镜、透射电子显微镜观察上皮瓣细胞形态结构变化;冰冻切片行酶组织化学检测上皮细胞(包括上皮瓣和周边上皮)三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的变化;石蜡切片行凋亡(上皮瓣)及增殖细胞核抗原免疫组织化学(周边上皮)检测实验二通过建立兔Epi-LASIK、PRK模型对比研究,随机分为1d、3d、5d、7d四组,并设立空白对照组。观察两种手术术后切削区域角膜基质细胞凋亡情况、角膜基质细胞数量、角膜基质炎症细胞数量、白细胞介素1(IL-1β)和转化生长因子(TGF-β2)表达情况结果实验一(1)形态学观察:KM5000D型角膜上皮刀分离的上皮瓣基底膜完整,细胞之间连接紧密, 7d时各层细胞基本保持正常的形态结构,上皮与基质之间结合紧密。(2)细胞酶活性:Epi-LASIK术后1d、3d、5d、7d上皮瓣细胞ATP酶、G-6-P酶活性分别为(79%、58%、69%、86%)(79%、63%、77%、97%)。提示:Epi-LASIK术后上皮瓣细胞经过了1d具有较高活性、3d下降、5d上升、7d基本恢复正常的曲线过程。(3)增生和凋亡:Epi-LASIK术后周边角膜上皮PCNA阳性数与空白对照组比较差异无统计学意义(F=1.10,P>0.05);Epi-LASIK术后上皮瓣细胞未见凋亡。提示:Epi-LASIK术后上皮瓣复位后未引起上皮瓣细胞凋亡和周边角膜上皮细胞过度增生,维持了较好的生理状态。实验二(1)角膜基质细胞凋亡:Epi-LASIK、PRK术后1d角膜基质细胞凋亡数目比较差异无统计学意义(t=-0.33,P>0.05);Epi-LASIK术后3d、5d、7d比PRK术后同时间段凋亡数目少,差异均具有统计学意义(t=-7.05、t=-5.93、t=-0.33,均P<0.01)。提示: Epi-LASIK术后引起角膜基质细胞凋亡数量较少、程度较轻。(2)角膜基质炎症细胞数量: Epi-LASIK术后1d、3d角膜基质炎症细胞数量比同时间段PRK少,差异均具有统计学意义(分别为t=12.42,P<0.01;t=4.57,P<0.05);术后5d、7d Epi-LASIK、PRK角膜基质几乎未见炎症细胞浸润。提示:Epi-LASIK术后炎症细胞浸润到角膜基质数量较少。(3)角膜基质细胞数量:术后1d、3d Epi-LASIK角膜基质细胞数量分别为18.33±7.03、19.20±3.03个/400倍视野,与正常角膜基质细胞数量比较差异无统计学意义(t=0.19、-0.24,均P>0.05),比同时间段PRK多,差异均有统计学意义(t=2.59、P<0.05,t=3.32、P<0.01);术后5d、7d Epi-LASIK角膜基质细胞数量增多,分别为33.57±10.03、42.00±9.72个/400倍视野,比正常角膜基质细胞数量多,差异有统计学意义(t=3.67、-7.99,均P<0.01);5d Epi-LASIK与同时间段PRK比较差异无统计学意义(t=0.22,均P>0.05); 7d Epi-LASIK比同时间段PRK数量多,差异有统计学意义(t=4.35,P<0.01)。提示:Epi-LASIK术后角膜基质细胞数量在1d、3d无明显变化,在5d、7d出现增多,说明Epi-LASIK术后引起较轻的角膜创伤愈合反应,有利于组织的修复。(4)术后7d形态学观察:Epi-LASIK术后角膜上皮与基质结合紧密,胶原排列规则,基质细胞呈静止状态;PRK术后角膜上皮与基质贴附较好,胶原排列相对紊乱,基质细胞核浆比例扩大,细胞器丰富,呈增生状态。提示:与PRK相比,Epi-LASIK术后7d角膜上皮与基质结合更紧密,胶原纤维分布更规则,角膜基质细胞更安静。(5)角膜上皮、基质TGF-β2、IL-1β表达角膜上皮TGF-β2、IL-1β表达情况:3d、5d、7d组Epi-LASIK、PRK角膜上皮表达差异无统计学意义(TGF-β2: t=0.06、t=-2.0、t=-1.8,均P>0.05;IL-1β:t=0.29、t=-1.29、t=-0.31,均P>0.05)。角膜基质TGF-β2、IL-1β表达:1d、3d组Epi-LASIK比PRK组角膜基质表达明显弱,差异有统计学意义(TGF-β2: t=-8.4、t=-3.1,均<0.05;IL-1β:t=-2.3、t=-2.7,均P<0.05);5d、7d组Epi-LASIK、PRK表达差异无统计学意义(TGF-β2: t=-1.9、t=-2.0,均P>0.05;IL-1β:t=1.8、t=-0.6,均P>0.05)提示:与PRK比较:Epi-LASIK术后TGF-β2、IL-1β在角膜上皮表达无差异,在角膜基质表达明显减弱,其机制可能主要是上皮瓣基底膜的完整起到了物理屏障作用。结论1、KM5000D型角膜上皮刀分离的上皮瓣基底膜完整,细胞之间连接紧密2、Epi-LASIK手术制作了较高活性角膜上皮瓣,保持了较好的形态结构和功能,最大限度的符合角膜上皮自然的生理状态3、Epi-LASIK术后早期角膜创伤愈合反应明显减轻,可能是由于(1)上皮瓣具有较高的活性,使机体应急反应减轻,上皮-基质间互相作用减轻;(2)上皮瓣基底膜的完整起到了物理屏障作用。