深海来源细菌Bacillus subtilis B5次生代谢产物的研究

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海洋微生物处于高压、低温(部分区域如热液口为高温)、厌氧、极度pH梯度、高盐浓度、高金属浓度、无光照、寡营养、高卤素等极端特殊环境中,可产生许多结构新颖、功能独特、毒副作用较轻的次生代谢产物。这类次生代谢产物是寻找新型活性化合物的重要源泉。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是芽孢杆菌属的一种,能产生多种活性次生代谢产物,具有抗菌、抗炎等生物活性。有关海洋枯草芽孢杆菌次生代谢产物的研究报道不断出现,使得来源于海洋枯草芽孢杆菌的天然产物已经成为海洋微生物天然产物的重要组成部分。  本文以深海沉积物样本中分离鉴定得到的一株具有抗炎活性和抗茶叶致病真菌活性的枯草芽孢杆菌B5为研究对象,对其次生代谢产物进行了深入的研究。首先对深海来源的菌种进行分离,得到一株具有抗炎和抗茶叶致病真菌活性的菌株,经鉴定为Bacillussubtilis B5,然后进行大规模的液体发酵培养,运用大孔吸附树脂、硅胶、ODS及制备液相等现代分离技术对其次生代谢产物进行分离,得到15个化合物。运用1D和2D NMR、HR-MS等现代技术对这15个化合物进行结构鉴定,发现15个化合物中有6个为大环内酯类化合物,另外9个化合物为吲哚类化合物。其中有两个大环内酯类化合物为新化合物,分别为7,15-epoxyl-macrolactinA(1)和7-O-2'-butenoyl macrolactin A(6),其余已知化合物分别为:1H-吲哚-3-甲醛(2),1H-吲哚-3-乙醇(3),1H-吲哚-3-基-苯基-乙二酮(4),3,3',3"-叔甲基-三-1H-吲哚(5),3,3'-亚甲基-双-1H-吲哚(7),3,3'-乙基-1,1-双-1H-吲哚(8),macrolactin E(9),2-羟基-1-(1H-吲哚-3-基)-乙酮(10),环-(色氨酸-脯氨酸)(11),macrolactin A(12),7-O-succinyl-macrolactin A(13),7-O-malonyl-macrolactin A(14),色氨酸(15)。  最后,运用滤纸圆盘扩散法检测了大环内酯类化合物1,6,12,13和14的抗茶拟盘多毛孢菌和炭疽病菌的活性,结果表明新化合物1和已知化合物12的抗真菌活性较好。运用MTS法测定大环内酯类化合物1,6,12,13和14的细胞毒活性,结果表明这5个化合物在测试浓度范围内(10~40μM)无明显细胞毒活性。在脂多糖(LPS)刺激后的RAW264.7巨噬细胞中,实时聚合酶链反应(RT-PCR),结果新化合物1能显著抑制一氧化氮合成酶(iNOS)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达,其他几个化合物也表现出不同程度的抑制作用。反转录聚合酶链反应表明新化合物1抑制IL-1βmRNA的表达呈剂量依赖性。  本文研究结果表明:开展深海微生物的次生代谢产物研究,对开发海洋新资源,寻找高效低毒的先导化合物具有重要的意义。
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