海藻糖（Trehalose，α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside）是由两个葡萄糖分子经半缩醛羟基结合而成的非还原性双糖，其具有的独特生物学特性可以保护生物大分子抵抗不良的环境压力。近十年来，其广泛的应用前景引起了各国科学家对其研究的极大兴趣。本实验室前人已克隆了玫瑰微球菌QS412中产海藻糖相关酶体系基因。本文主要致力于采用基因工程的手段，构建基因工程菌，实现麦芽寡糖基海藻糖水解酶（maltooligosyltrehalose trehalohydrolase，MTHase）在大肠杆菌中的表达和酶活性研究。首先设计引物克隆玫瑰微球菌QS412中麦芽寡糖基海藻糖水解酶的基因treZ，插入表达载体pET28a（+）中，构建重组质粒pET-MTH，使得重组菌株E.coli BL21（DE3）（pET-MTH）在LB培养基中，28℃用0.1mmol／LIPTG诱导8h，表达融合蛋白6His-MTHase，外源蛋白表达量占菌体总蛋白的30％。收集发酵液菌体，洗涤破碎，测定破碎全菌液酶活，得每升发酵液所得酶活是44U。载体pET-MTH在E.coli BL（DE3）中表达的His-MTHase融合蛋白绝大部分以包涵体形式存在。温度是影响蛋白表达水平和菌体生长的最主要因素，经过4℃～37℃温度范围，和0.04～1 mmol／L IPTG诱导剂浓度范围进行诱导，发现二者对提高酶活无显著影响，最后确定重组菌的发酵诱导条件为28℃，0.1 mmol／L IPTG，诱导6h。对破碎菌体所得的包涵体，本文进行洗涤、溶解、尝试透析复性，并对复性后蛋白进行酶活检测，但检测不到酶活，可能复性后的空间结构不对。考虑到T7启动子太强导致表达的外源蛋白His-MTHase绝大部分以包涵体形式存在，尝试将treZ基因插入到带弱启动子的载体中。采用了清华大学化工系李强老师自主构建的组成型表达载体，构建了重组质粒pGEMKT-HPf-MTH，转化入大肠杆菌宿主菌中，但没有明显的表达，也检测不到酶活。综上，本文的工作使得来源于玫瑰微球菌QS412麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因在大肠杆菌中实现了活性表达，为进一步更换表达载体和宿主菌，实现基因工程菌表达重组蛋白的高酶活奠定了基础。