活性氧基(ROS)占体内自由基的绝大多数。当氧化反应增强和／或抗氧化能力受损时，氧化还原动态平衡遭到破坏而向着有利于氧化损伤的方向发展，即产生氧应激(Oxidative Stress，OS)。活跃的自由基将导致脂质，蛋白，DNA和RNA的氧化损伤，从而导致生理机能和细胞形态的损害。 细胞凋亡在维持神经系统的正常发育和功能中起着重要作用。氧应激状态可能是细胞凋亡发生的一个重要媒介，许多凋亡刺激可使胞内ROS产生或伴有氧应激，而许多凋亡的抑制剂具有抗氧化活性或加强细胞抗氧化能力。凋亡过程需要能量，被细胞内氧化还原反应准确地调节。然而胞内氧化还原变化何时并如何调节凋亡过程，还有在这个细胞调节过程中涉及的对氧化还原敏感的特殊分子，目前尚不明确。 在本研究中，为验证氧应激与凋亡之间的机制联系，了解氧应激与细胞凋亡引发神经元损伤的机制，我们设计如下实验：给予ROS能否引发凋亡；凋亡是否伴随ROS的诱导；给予外源性的抗氧化剂能否阻止凋亡发生；探讨抗凋亡蛋白Bcl-2是否具有抗氧化作用；由于抗氧化剂的剂量很少被关注，因此给予不同剂量的GSH，是否存在剂量依赖关系。 将雄性Wiseer大鼠随机分4组，N=6。1)氧应激组：左侧纹体内注射100μmol／l的CumOOH，注射量为30μl。2)对照组：左侧纹体内仅注射生理盐水。3)GSH给药组：由鼠尾静脉输入GSH，18小时重复一次，共3次。第3次注射后18小时，左侧纹体内给予100μmol／ml的CumOOH。该组又分成GSH大剂量给药组：鼠尾静脉输入GSH120mg／kg。以及GSH小剂量给药组：鼠尾静脉输入GSH75mg／kg。以上动物均于实验结束2h断头处死。 博土研究生学位论文 用高效液相－电化学检测技术测定纹体及皮层中 DHBA和 SA含量；应 用免疫组织化学技术，末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 （TU’N’EL）法分别检测 Bcl－2细胞阳性率，原位细胞死亡。 通过实验得出以下结果： 1．利用水杨酸捕捉技术，高效液相－电化学检测DHBA／SA来反映”OH 的含量，灵敏度高（可达10””～10－’‘mol几），特异性好。并且水杨酸（SA） 无毒，便子从各种组织中提取，动物实验或临床均可应用等，这种亘接测定DH 的方法为研究自由基提供了可靠的手段。 2．纹体内注入枯烯过氧化氢（Cumene Hydroperoxide，Cum00H），一种氢 过氧有机化合物，能迅速引发组织的脂质过氧化反应，HPLC检测到鼠脑皮层 及纹体的DH水平较对照组上升，分别为对照组的Zll％、24％（P t 005）。 因此Cum00H－氧应激模型成立，可用于研究氧应激。 3．免疫组织化学技术检测：氧应激时皮层及纹体细胞凋亡的抑制蛋白 BC12的阳性率降低，为分别为对照组的 43％和 45％（P＜005）。 4．TUNEL法检测：对照组未见凋亡细胞。发现给予Cum00H Zh后皮层 及纹体有较多的细胞凋亡数目出现。 5预先给予三次不同剂量GSH，HPLC观察到GSH能对抗氧应激，降低 羟自由基水平。GSH75组皮层及纹体的DH水平分别下降为氧应激组的68％ 和啊％（P＜005人＊sH12O组皮层及纹体的＊H水平分别下降为氧应激组 的79％和6州（P＜0刀5人＊SH是细胞中最重要的非酶性小分子抗氧化剂 之一，维持氧化还原能力，保护细胞免遭氧化损害。 6．但GSH这种抗氧化效应不呈剂量依赖关系：小剂量的GSH能减少 细胞凋亡数目，皮层及纹体分别为氧应激组的狈％和M％（P＜0刀5）。增加 BCI－2的细胞阳性率，皮层及纹体分别为氧应激组的167o和150o（P＜0．05）。 而大剂量的GSH则不能，细胞凋亡数目，B。12的细胞阳性率与氧应激组相 比无明显差异。 3 博士研究生学位论文 结论：纹体内给予Cum00H可引起鼠脑急性氧应激，导致DH水平上升， 因此该氧应激模型成立。氧应激时细胞凋亡数目增加，说明氧应激能够介导 凋亡。氧应激时抑制细胞凋亡蛋白B。12的阳性率降低。而适当剂量的抗氧 化剂－GSH能通过降低氧应激水平，上调Bcl－2的表达，抑制Cum00H诱导的 细胞凋亡而保护神经细胞。B。1．2也与ROS有密切关系。B。1．2缺乏导致细 胞不能对抗氧应激而易发凋亡。凋亡与氧应激和抗氧化剂的关系，说明它对 氧化还原反应敏感。而GSH作用的双相性说明外源性的抗氧化剂的剂量及 其不同抗氧化剂之间的平衡，在抗氧化损伤中可能也起重要的作用。