目的:肝纤维化是许多肝脏疾病发展成为肝硬化的重要病理过程,目前还没有疗效良好的治疗药物。本课题研究积雪草酸对胆汁性肝纤维化小鼠的治疗作用,并探讨积雪草酸的作用机制,为其应用于肝纤维化的治疗提供实验依据。方法:本研究通过胆管结扎(BDL)诱导小鼠肝损伤及肝纤维化建立在体实验模型,并以甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)处理HL-7702细胞建立体外肝损伤模型,通过在体和离体实验探讨积雪草酸的抗肝纤维化作用及机制。在体实验:结扎C57小鼠的总胆管,建立淤胆型肝损伤模型,分为假手术对照组、模型组、积雪草酸15 mg/kg组和30 mg/kg组,每组6只。各组小鼠连续灌胃给药5天。测定血清生化指标水平来检测肝功能。称量小鼠肝脏及脾脏组织,并计算肝脏指数和脾脏指数。检测肝组织内MDA(丙二醛),SOD(超氧化物气化酶)和Catalase(过氧化氢酶)和GSH(还原型谷胱甘肽)分析小鼠肝组织氧化应激。将肝脏组织切片H&E染色、Masson染色进行病理学检查,TUNEL染色检测肝细胞凋亡;α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)免疫组化及Western blot检测肝纤维化程度。采用实时荧光定量PCR测定炎症因子及肝纤维化因子相关基因的mRNA水平,分析积雪草酸对炎症、肝纤维化的改善作用;测定胆汁酸代谢相关的基因表达水平,分析胆汁酸代谢调节途径。Western blot法检测Bax、Bcl-2的表达水平,分析积雪草酸的抗凋亡机制;检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)的蛋白表达水平,研究积雪草酸的抗氧化机制。离体实验:采用GCDC作用于HL-7702细胞建立体外肝损伤模型,分为对照组、模型组和不同浓度的积雪草酸处理组,MTT法检测细胞活性,Annexin V/PI双染法通过流式细胞仪检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测Nrf2的蛋白表达水平。结果:在BDL小鼠模型中,我们发现BDL模型组小鼠肝脏肿大、欠光泽,肝组织出现胶原沉积、炎性细胞浸润的现象,积雪草酸给药后能够改善BDL小鼠的肝组织形态和病理特征,降低肝脏指数和脾脏指数。BDL模型组小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、羟脯氨酸(Hyp)、总胆固醇(T-CHO)、总胆红素(TBIL)和总胆汁酸(TBA)的水平显著上升,积雪草酸给药能够显著降低这些生化指标的水平,高剂量效果更明显。同时,积雪草酸能够减少肝组织α-SMA的表达;降低纤维化因子Ⅲ型胶原蛋白(Col3a1)、波形蛋白(Vim)、肌动蛋白(Acta2)、转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达水平;降低促炎因子包括前列腺素内过氧化物合成酶2(Pgst2)、IL-6、TNF-α、趋化因子配体3(CCL3)的mRNA表达水平。积雪草酸给药作用后,上调Bcl2,下调Bax表达,减少肝组织细胞的凋亡。积雪草酸给药能够抑制BDL小鼠肝组织的氧化应激水平,表现为MDA含量的降低,SOD、GSH和Catalase水平的提高,促进Nrf2和HO-1的蛋白表达。此外,积雪草酸给药能够调控BDL小鼠的胆汁酸代谢途径相关基因,法尼酯X受体(FXR)、胆固醇7α-羟化酶(CYP7α1)、小分子异源二聚体伴侣(SHP)、成纤维细胞生长因子(FGF15)的mRNA水平,减少肝组织内胆汁酸淤积。离体实验表明积雪草酸能够有效的保护GCDC诱导的HL-7702细胞损伤。实验结果显示,积雪草酸处理可以显著增加细胞存活率(P<0.001);减少细胞内ROS生成,降低细胞凋亡率,抑制作用均呈浓度依赖性增强;促进HL-7702细胞表达Nrf2蛋白。结论:在体实验水平,积雪草酸具有显著改善BDL鼠肝纤维化的作用,抑制氧化应激,抑制炎症反应,调控胆汁酸代谢,改善肝组织形态和功能;在细胞水平上,积雪草酸对抗GCDC诱导的HL-7702细胞损伤,抑制ROS的增加,减少细胞凋亡,促进Nrf2的表达。本论文研究结果揭示积雪草酸有改善胆汁性肝纤维化的作用,其机制可能与抗凋亡以及Nrf2介导的抗氧化和调控胆汁酸代谢有关。