rAAV2/hVEGF165体外转染大鼠心肌细胞的实验研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kinghuang1982
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目的:探讨重组2型腺相关病毒(rAAV2)介导人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因在常氧培养与低氧培养的大鼠原代心肌细胞的表达差异.方法:采用绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为报告基因,以rAAV2/EGFP(感染复数分别为2×10<4>,10<5>,5×10<5>))体外转染大鼠原代心肌细胞,研究rAAV2的转染效率;以rAAV2/hVEGF165(感染复数为5×10<5>)转染大鼠原代心肌细胞,采用Kuwabara等方法并加以改进对心肌细胞进行低氧培养,并于培养的即刻、24小时、48小时、72小时分别应用RT-PCR技术检测VEGF165 mRNA表达、ELISA法检测hVEGF165蛋白的水平,并与对照组(予以常氧培养)进行比较.结果:随着感染复数(MOI)的加大,rAAV2的转染效率相应提高,其转染效率分别为35%、85%、95%;rAAV2/hVEGF165体外转染后,低氧培养的心肌细胞在24小时、48小时、72小时hVEGF165 mRNA转录水平均明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);在低氧培养的24小时、48小时、72小时其培养上清中hVEGF165蛋自含量亦明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05).结论:rAAV2能有效转染大鼠心肌细胞;rAAV2介导的hVEGF165基因在常氧培养与低氧培养的大鼠原代心肌细胞的表达有明显差异,低氧可促进rAAV2介导的hVEGF165基因在心肌细胞的表达.
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