论文部分内容阅读
目的:优选黑果小檗花色苷的最佳超声提取工艺,确定黑果小檗花色苷中的主要有效成分,研究黑果小檗花色苷中主要有效成分对Aβ25-35诱导PC12细胞构建的AD细胞模型的保护作用及其作用机制研究。方法:1以pH示差法测定花色苷含量作为评价指标,利用单因素轮转法和正交试验法确定花色苷的提取时间、提取次数、提取溶剂等参数;利用薄层色谱法和高效液相色谱法,分析黑果小檗花色苷的主要有效成分。2用MTT法检测不同浓度的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对PC12细胞的毒性、Aβ25-35作为造模剂的浓度、不同浓度的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对Aβ25-35损伤的PC12细胞保护作用浓度;用ELISA法检测不同浓度的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞LDH、SOD、MDA、ROS、GSH-PX等因子释放量的影响;用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响;用WB法检测不同浓度的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞内 Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9、Cleaved Caspase-9蛋白表达量的影响。结果:1乙醇浓度70%,盐酸浓度0.8%,料液比1:25（g:mL）提取时间20 min,提取次数4次,花色苷含量最高;黑果小檗花色苷中主要成分为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。2矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在浓度为0-500 μg/mL时,没有细胞毒性、Aβ25-35作为造模剂的浓度为40 μmol/L、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对Aβ2535损伤的PC12细胞保护作用低剂量组浓度为3.90625 μg/mL、中剂量组浓度为15.625μg/mL、高剂量组为62.5μg/mL;矢车菊素-3-O-葡萄糖苷抑制Aβ25-35损伤的PC12细胞LDH、MDA、ROS的释放,促进SOD、GSH-PX的释放;矢车菊素-3-0-葡萄糖苷能够抑制Aβ25-35损伤的PC12细胞的凋亡;矢车菊素-3-O-葡萄糖苷能够抑制 Aβ25-35损伤的 PC12 细胞内 Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9、Cleaved Caspase-9的蛋白表达,促进Bcl-2、Akt、p-Akt的蛋白表达。结论:1优化的提取方法用于提取黑果小檗花色苷工艺稳定可行;黑果小檗花色苷中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为主要有效成分。2矢车菊素-3-0-葡萄糖苷对Aβ25-35诱导PC12细胞构建的AD细胞模型的存在保护作用,其保护作用可能是通过抑制细胞氧化、通过激活PI3K/Akt通路抑制细胞凋亡而产生,矢车菊素-3-0-葡萄糖苷可以作为预防AD的潜在候选物质之一。