目的本研究通过对分离自某儿童医院的对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌进行探讨,以了解其基因型、耐药表型以及相互之间是否有同源性的存在,验证是否为克隆播散引起的医院感染。方法连续收集2016年10月-2017年4月非重复的13株分离自某儿童医院住院患儿的对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌。将这些菌株通过法国梅里埃生物公司的Vitek-2 Compact系统重新进行菌种的鉴定和药敏试验,并通过亚胺培南-EDTA复合E-test条试验和改良的Hodge试验检测是否有碳青霉烯酶的产生。然后,通过聚合酶链式反应（PCR）试验对这些菌株扩增,检测是否携带有碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶以及其他的耐药相关基因,并对扩增产物的测序分析以确定其基因型。通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分析（MLST）试验和BioNumerics聚类软件分析菌株之间的同源性。最后,基于二代MiSeq和三代MinION测序平台,获得携带碳青霉烯酶耐药基因的质粒全序列,并使用BLASTN、ResFinder、ISFinder和INTEGRAL等软件分析该质粒的移动元件和携带的耐药基因等信息。结果药敏结果显示这13株菌株均为多重耐药菌,对临床上常用的多种抗生素,如头孢菌素类、青霉素加酶抑制剂类和碳青霉烯类等均耐药。亚胺培南-EDTA复合E-test条试验全部菌株均为阴性,但改良Hodge试验全部菌株为阳性。PCR扩增和产物测序显示所有菌株都携带bla_KPC-2基因,且同时还携带多个其他耐药基因。除肺炎克雷伯菌H1菌株外,其余菌株还携带有bla_TEM-1B耐药基因,也有多株菌同时携带有bla_SHV-12和bla_CTX-M-65耐药基因。经过对13株菌的7个管家基因进行扩增、测序和将结果进行网站比对,结果显示除了1株为ST278型外,其他12株菌株的MLST分型都是ST11型。在这12株ST11型菌株中,其中有8株菌（H2^H8和H10号）脉冲场凝胶电泳的条带数目和位置相差值在3条以内,且相互间脉冲场凝胶电泳聚类分析有93.7%¹00%的相似度,表明这8株菌之间存在克隆聚集性。基于MiSeq和MinION测序平台获取了肺炎克雷伯H4菌株携带的质粒pKPC-QL24的全序列（Accession Number.MH263653）,经分析显示该质粒含有氨基糖苷类耐药基因rmtB和β-内酰胺类耐药基因blaKPC-2、blaSHV-12、blaCTX-M-65及blaTEM-1B。结论我们的研究结果显示,携带有bla_KPC-2、bla_CTX-M-65、bla _SHV-12和bla_TEM-1B基因的ST11型肺炎克雷伯菌的克隆聚集流行是引起住院患儿医院感染暴发的原因。这属于首次报道。因此,应引起临床上的高度重视,并加强对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的监测以及抗生素的合理使用。