【摘 要】
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豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)广泛存在于自然环境中,属于条件性致病菌,可以感染人和多种水生动物。2015年6月,辽宁鞍山某狐狸养殖场偶发病原菌感染。病死狐狸后肢肌肉液化,
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豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)广泛存在于自然环境中,属于条件性致病菌,可以感染人和多种水生动物。2015年6月,辽宁鞍山某狐狸养殖场偶发病原菌感染。病死狐狸后肢肌肉液化,出现溃疡。为了查明致死原因,进行了实验室诊断。1.本实验室从狐狸病灶部位分离到一株优势菌株,命名为M12。对M12进行表型鉴定、16S rRNA和管家基因gyrB分子水平鉴定、生理特性分析、毒力基因检测、小鼠毒力试验及药敏试验,结果显示该株菌为豚鼠气单胞菌,革兰氏阴性、短杆状,最适生长温度30℃,最佳pH 78;BLAST结果显示16S rRNA和gyrB基因与GenBank上的豚鼠气单胞菌同源性达到100%,将16SrRNA测序结果提交到GenBank,获得登陆号KX170836;M12含有细胞毒性肠毒素(cytotoxic enterotoxin,act)和热敏感细胞肠毒素(heat-Labie cytotonic enterotoxin,alt)两种毒力基因;小鼠感染试验表明M12的LD50为8×108 CFU/ml,具有很强的致病性;药敏试验结果显示该菌对头孢类抗生素具有很强的敏感性,从而为该菌的防治提供依据。2.本实验室采用家兔回肠体外组织培养(IVOC)和腿部肌肉注射两种方式去探究该病原菌的致病机制。运用光学显微镜、电子显微镜等多种手段从微观视角去研究M12的菌体结构、致病过程和感染组织的病理变化。在电镜观察下发现M12除鞭毛外细菌大小为(0.61.6)μm×(0.60.7)μm,鞭毛长度是菌体长度的23倍;IVOC试验结果在SEM电镜下观察可以看到M12黏附在肠上皮聚集成团,形成生物膜结构,肠上皮细胞破损;病理切片观察发现M12对家兔肠、肝、肺、肾、肌组织都有损伤。本试验为豚鼠气单胞菌致病性的深入研究奠定了基础。3.本研究提取豚鼠气单胞菌M12的胞外产物(ECP)后,测定浓缩ECP的主要成分、蛋白含量以及其对Vero细胞的毒性,通过肌肉注射和肠攀试验探究其对家兔的致病性。结果表明该菌的胞外产物中含有酯酶、蛋白酶、淀粉酶、明胶酶和脲酶活性;细胞毒性检测发现ECP可以使Vero细胞发生病变,变圆,脱落。肠攀试验显示M12具有肠毒性。M12对温度和pH较敏感,它的最适酶活温度是37℃,最适pH为7.0。SDS-PAGE图谱可以发现36 kD、42 kD、68kD三条蛋白条带;用ECP注射家兔腿部发现肌肉组织溶解;回肠注射后肠道内容物含量显著增多。综上所述,M12具有多种毒力因子,与该菌的致病性紧密相关。
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