SeNHX1基因是从盐生植物盐角草中(Saliconia europaea L.)克隆得到的液泡型Na+/H+逆向运输蛋白基因,其表达的Na+/H+逆向运输蛋白定位在液泡膜上。液泡型Na+/H+逆向运输蛋白可将细胞质中的Na+转运至液泡中,其在维持细胞质内离子平衡,调节细胞质酸碱度和维持细胞渗透压等方面发挥着重要作用。在前期研究工作中,利用农杆菌介导法对烟草进行耐盐基因SeNHX1转化,并获得了烟草转化植株。为了探讨耐盐基因SeNHX1在烟草中的表达规律,及其对转基因烟草耐盐性的影响,本论文研究课题以转SeNHX1基因烟草转化植株为材料,对其进行分子生物学鉴定,利用RT-PCR、实时荧光定量PCR对SeNHX1基因在转基因烟草中的表达及表达量进行测定,并对转SeNHX1烟草在盐胁迫下的生理生化特征进行检测和分析。主要研究结果如下:(1)对转SeNHX1基因烟草T0代转化植株进行PCR检测,结果显示SeNHX1基因成功转入烟草中,初步确定6株转SeNHX1基因烟草植株,分别为S1、S2、S3、S4、S5、S6;分别对以上转基因烟草植株T1代进行PCR检测,结果初步表明SeNHX1基因遗传到转基因烟草T1代中。(2)分别提取转SeNHX1基因烟草和非转基因烟草的RNA,反转录生成cDNA进行RT-PCR,凝胶电泳出现阳性条带,表明转基因烟草中SeNHX1基因在转录水平上表达,并进一步确定其为转基因植株。(3)利用实时荧光定量PCR对Se NHX1基因在转基因烟草中的表达量进行测定,SeNHX1基因在非转基因烟草和转基因烟草S1、S2、S3、S4、S5、S6中的表达量分别为:0%、20%、26.7%、14.29%、25%、12.5%、23.1%。(4)以NaCl为盐胁迫因子,胁迫浓度分别为0 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L;检测非转基因和转SeNHX1基因烟草在不同盐胁迫浓度下的抗氧化酶活性、MDA和叶绿素含量的变化,结果如下:1)非转基因烟草和转SeNHX1基因烟草的SOD、APX、CAT、POD活性随盐浓度的升高而升高,转SeNHX1基因烟草抗氧化酶活性均高于同NaCl胁迫浓度的非转基因烟草。2)在无盐胁迫的处理条件下,转SeNHX1基因烟草和非转基因烟草的MDA含量差异不大,在盐胁迫下,所有烟草MDA含量随着NaCl浓度的升高而升高,所有转SeNHX1基因烟草植株的MDA含量均低于非转基因烟草。3)在盐胁迫下,转SeNHX1基因烟草和非转基因烟草的叶绿素含量均下降,并且与NaCl浓度呈负相关;在同NaCl胁迫浓度处理条件下,非转基因烟草叶绿素含量低于转SeNHX1烟草,并且随着NaCl浓度升高,下降明显。(5)将转SeNHX1基因烟草的T0代种子和非转基因烟草种子用次氯酸钠消毒后播种于含0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、150 mmol/L、200 mmol/L NaCl的1/2 MS培养基上,2周后统计发芽率。结果如下:1)在0 mmol/L NaCl的处理条件下,非转基因烟草和转SeNHX1基因烟草种子的发芽率都接近100%;2)当NaCl浓度为50mmol/L、100 mmol/L时,所有烟草种子发芽率呈下降趋势,但非转基因相对转SeNHX1基因烟草下降幅度稍大;3)当NaCl浓度为150 mmol/L时,所有烟草种子发芽率大幅度下降,非转基因烟草种子下降显著;4)当NaCl浓度为200 mmol/L时,所有烟草种子发芽率降至最低,非转基因发芽率只有8%,转基因烟草发芽率在25%左右,其中S3转SeNHX1基因烟草植株发芽率最高。