论文部分内容阅读
目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一。在我国居肿瘤发病率第三位及恶性肿瘤死亡率第二位,生存率低,复发率高,早期发现及早期诊断成为治疗的关键。激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)与基因芯片是后基因组时代新出现的两种技术。前者能在显微镜直视下捕获单一细胞或细胞群,成功避免组织异质性对检测的干扰;后者直接快速检测微量RNA,可同时对成千上万基因进行监测,为差异表达基因的筛选提供强有力的工具。本研究联用上述两种技术,构建纯化HCC组织和正常肝组织基因表达谱,筛选HCC发病相关基因。方法:对4例单发、无转移的HCC患者标本先行LCM获取纯净肝癌细胞和正常肝细胞,并分别提取微量RNA,采用Agilent 2100 Bioanalyzer进行微量RNA质量鉴定。对质检合格的微量RNA进行线性扩增及cy3、cy5双色荧光标记后,再与Agilent human 4*44K基因芯片杂交。芯片经洗涤、扫描后,以Feature Extraction软件对cy3和cy5进行Normalize标准化处理,进而筛选出与HCC发病相关的候选差异表达基因。统计在所有样本中共同上调和共同下调的基因,对筛选出来基因依次进行排序和分类,探讨表达显著上调及下调的前十位候选差异表达基因与HCC的关系。结果:在4对样本基因表达谱中,纯化肝癌与正常肝组织共同差异表达的基因有1361条,上调基因607条,下调基因754条。在前10位极显著上调和下调的差异表达基因(即共20条)中,对照文献,6条为HCC已知差异表达基因,10条表达变化与其他肿瘤研究报道一致,4条为在HCC和/或其他肿瘤中均没有报道过的差异表达基因。结论:1、联合应用激光捕获显微切割与基因芯片技术成功构建了HCC差异表达基因谱。2、对差异表达基因的研究有望为HCC提供新的诊断及治疗靶点。