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漆酶作为绿色生物催化剂己被广泛应用在造纸生产、纺织加工、工业废水处理等诸多领域中。本文以栓菌厂扣烈SP.LS-10C固态发酵农产品副产物柚皮和麸皮生产漆酶并优化了其培养基组分,采用三相法对发酵后的漆酶进行分离提取,运用吸附-交联法将漆酶固定在大孔树脂上并研宄其对果汁的澄清效果,利用制备的漆酶降解双酚A以研宄其对双酚A的降解性能。通过本研宄以期为漆酶的高效生产与应用提供一定的理论基础。主要研宄内容如下:(1)为降低漆酶生产成本,本文以麸皮和柚皮为主要固态发酵基质,优化了栓菌固态发酵培养基组分。实验表明,在培养基组分为:麸皮和柚皮粉比例为6:4(w/w)、固液比1:2.5(w/v)、铜离子2°/。(w/w)、蔗糖3%(w/w)、硝酸钾2%(w/w)、稻壳20°/。(w/w)的条件下,栓菌发酵产漆酶酶活最高,发酵lid后,酶活可达到38.4 U/gds。(2)为高效提取栓菌固态发酵基质中漆酶,提高酶的纯度和回收率,利用三相法从粗酶液中分离提取漆酶,考察了影响三相提取效果的因素。实验最佳的三相分离条件为:硫酸铵浓度为50%(w/v)、粗提液与叔丁醇体积比1:1.5、体系pH6、温度25°C、超声功率60 W、超声5 min,在此条件下,漆酶纯化倍数和酶活回收率达到最大,分别为8.7和108.9%。(3)为拓展漆酶在澄清果汁中的应用,以大孔树脂AB-8作为吸附载体和TGase为交联剂对漆酶进行吸附-交联固定化。优化后的固定化条件为:吸附pH4、吸附时间4h、吸附温度25°C、载体添加量10 mL/g、TGase酶浓度200 U/mL、交联温度30°C、交联时间2 h,交联pH4。在此条件下,漆酶固定化的酶活为267 U/g,酶活回收率为86.2%。通过对酶学性质的考察,固定化漆酶具有更好的热稳定性和pH稳定性,并且在重复使用6次后仍保持原始活性的40%。考察固定化漆酶对苹果汁的澄清效果,在漆酶添加量8U/10mL、55°C条件下酶解150 min后,总酚降解率为53.2%。与25°C保藏条件相比,酶处理后的果汁在4°C下保藏时具有更好稳定性,其总酚含量降低8.1%,色值变化率6.7%,浊度值增加10。(4)为考察漆酶对双酚A降解能力,利用发酵制备的漆酶对双酚A进行降解研究。研宄显示,当pH为5、双酚A浓度10 pg/mL、漆酶浓度5.1 U/mL时,体系在55°C条件下酶解140 min后,双酚A基本降解完全。