前言 长期大量饮酒可引起肝脏、肾脏、神经、心脏、胰腺等多脏器的功能损害，产生一些特殊的临床表现。但有一些非特异性消化道症状，如腹胀、食欲不振、恶心等用上述脏器功能异常难以解释，推测可能与乙醇造成消化道黏膜，尤其是胃黏膜的受损有关。众多的动物实验研究显示，短期内摄入大量高浓度的乙醇，可造成急性胃黏膜损害和一些细胞因子的改变，而相对少量、中(或低)浓度的乙醇长期摄取，对胃黏膜损害和细胞因子变化的研究较少。本研究应用乙醇灌胃的方法，建立慢性酒精性胃损害模型，探讨不同时期胃黏膜的病理改变，以及促进胃黏膜上皮细胞增殖、分化的细胞因子—转化生长因子-α(TGF-α)的变化。 实验材料 一、实验动物 雌性Wister系大鼠46只，对照组16只，模型组30只。 二、主要试剂 1．无水乙醇 2．小鼠抗大鼠转化生长因子-α(1：100)，链酶抗生物素-生物素(SABC)试剂盒及3，3-二氨基联苯胺(DAB)显色试剂。 三、主要仪器 1．石蜡切片机 2．光学显微镜及照相装置 3．显微（荧光）图像分析系统 实验方法 一、动物模型 46只大鼠随机分为两组：对照组历只，模型组30只。模型组给予40％乙醇门 y·by－‘·day－’厂分三次灌胃至4周末；自第5周开始，将乙醇浓度增至50％乃·吨一’·抑一’入分三次灌胃至8周末；自第9周开始，50％乙醇门·kg－‘·dw－‘）分三次灌胃至12周末。对照组动物给予相同容积的生理盐水，日三次灌胃。于开始灌胃4周末S周末＊2周末分别处死模型组10＊2在只及对照组动物55在只。 二、病理学检查 沿胃大弯将胃剪开、冲洗，展平于玻璃板上，置光学显微镜下，用微尺测量损伤情况，损伤指数计分参考Guth等标准。每隔0．3cm作全胃横向平行系列切块，制成石蜡块。连续切成 5 pm的切片，常规HE染色，光镜下观察其病理改变。以Mascuda等标准进行损伤程度累计积分。 三、免疫组化ABC法检测转化生长因子心（TGF0） 石蜡切片脱蜡至水，灭活内源性酶，抗原修复，加正常兔血清，力一抗＊＊＊a（二：100）4℃过夜，滴加二抗Zo－37℃20分钟人＊复合物20—37℃20分钟，以上各步均以 0．olM的朋S充分洗涤。DAB显色，苏木素轻度复染，显微镜下观察。以细胞浆中有棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。应用显微（荧光）图像分析系统对选取视野内TGF心免疫组化阳性信号进行分析。 五、统计学处理： 统计学分析采用SPSS10．0软件，计量资料各组间比较采用ANOVA检验。 ·2· 实验结果 一、一般状况 模型组大鼠同对照组相比，一般状态差，毛色无光泽，易激惹，体重减轻瞩叩．01八 二、胃组织病理学改变 对照组胃大体标本可见部膜光滑pE染色标本镜下擂膜未见异常。酒精灌胃4周末，胃摊膜点状糜烂、充血水肿、中性粒细胞浸润；8周末，胃城膜多发糜烂，主、壁细胞肿胀，数量减少，多种炎性细胞浸润；12周末，胃薄膜见点状出血，多发糜烂，腺上皮萎缩，腺体变小，数量减少，淋巴细胞、浆细胞浸润。 三JGF忙在胃的表达 模型组与对照组相比，胃TGF心的表达均增加，具有显著性差异河＜o．0门；随着乙醇刺激时间的延长和剂量的不断加大，各模型组之间胃＊＊卜a的表达也逐渐增加评＜0．01人 讨 论 胃是乙醇无需吸收人血而直接损害的器官，因此保持胃励膜的完整、减少胃部膜的损害程度，对减少乙醇导致各脏器的损害至关重要。短期内大量高浓度的乙醇可导致胃效膜急性损伤，而慢性摄取低浓度的乙醇导致胃新膜损害的研究较少。 在临床上常常看到一些酒依赖者或酒精性肝病患者，出现上腹饱胀、纳差或各种各样的消化不良症状，而肝功能又无明显的改变，考虑可能与慢性酒精刺激造成胃肠新膜的损害有关。本研究中可见，随着酒精的持续刺激模型组不仅体重明显比对照组降低， ·3·而且病理改变也逐渐加重。低倍镜下可见自糜烂到小溃疡形成，高倍镜下见自部膜的充血水肿到腺体萎缩。并发现炎性细胞浸润在不同的阶段表现不同，由最初的中性粒细胞浸润变成后期的淋巴细胞和浆细胞浸润。这种现象的详细机制不清，可能是机体对乙醇慢性刺激的一种适应性反应，主要是免疫反应。腺体的萎缩和过度的免疫反应是消化道症状出现的病理生理基础。 胃的主细胞、壁细胞表面有乙醇脱氢酶（ADH）的表达，后者参与乙醇在胃的首过代谢（FPM人FPM可减少机体对乙醇的生物利用度，缓解乙醇对肝脏、脑等器官毒害作用。实验中随着乙醇作用时间的延长和剂量的增加，主细胞、壁细胞由水肿到萎缩，ADH的表达减少，FPM下降，从而加重了慢性嗜酒者的乙醇生物利用度，加重了对肝脏的负荷，加速了酒精性肝病的发生和发展。 有研究表明，受损伤的胃新膜能分泌表皮生?