具有穿透及光动力治疗功能的肿瘤细胞膜囊泡的研究

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目前,抗肿瘤纳米载药体系主要由有机或无机的纳米颗粒构成,对于改善抗肿瘤化疗药物疗效,降低副作用起到了很大帮助。但是人工合成的纳米材料在生物相容性方面始终有所欠缺,因此,天然来源的细胞膜所制成的纳米囊泡引起了越来越多研究者的关注。肿瘤细胞膜囊泡具有良好的生物相容性和主动靶向功能,适合作为纳米载药体系。由细胞膜制备的囊泡可以通过其与肿瘤细胞的结合将药物运输到肿瘤细胞。同时,由于细胞膜囊泡具有一定变形性,可以帮助抗肿瘤药物穿透到肿瘤深层,实现更好的抗肿瘤效果。光动力治疗是一种局部可控的非侵入性治疗肿瘤的手段,具有毒性低,普适性强等优势,尤其大多数光敏剂为疏水性物质,因此可以将肿瘤细胞膜构成的纳米载药体系与光动力疗法相结合,构建一个具有肿瘤穿透功能的纳米载体,使其在抗肿瘤的光动力治疗中发挥更好效果。在本论文中,首先合成了具有双亲性结构的大分子(甲氧基封端聚乙二醇-乙二醇化壳聚糖-原卟啉,PGP)并通过核磁共振以及红外光谱等表征了产物的结构。随后,通过PGP材料与细胞共孵育实验验证了PGP能通过亲疏水作用嵌合到细胞膜上。由于PGP与细胞膜的亲疏水相互作用,可以通过双亲性分子与细胞膜的自组装获得有PGP修饰的细胞膜,再经过膜挤出可以获得纳米级细胞膜囊泡PGPM。通过透射电子显微镜(TEM)、动态激光散射纳米粒度仪(DLS)对囊泡的形貌和结构进行表征。所制得的囊泡具有类似胶束中空结构,囊泡粒径大约为220 nm。通过流式细胞术考察PGPM囊泡上光敏剂存在情况,可以看出所制备囊泡上存在原卟啉荧光信号,阳性率高达70%以上,说明PGPM囊泡的成功制备。最后,考察了所制备双亲性分子PGP以及PGPM囊泡的细胞毒性,在非光照条件下PGP分子与PGPM囊泡均具有良好的生物相容性,说明可以用作药物传输体系。体外细胞毒性实验表明,在635 nm激光照射下,PGP分子以及PGPM囊泡都可以通过光动力治疗抑制4T1细胞的增殖,进一步采用多细胞肿瘤球模型,验证了PGPM囊泡能穿透肿瘤细胞球。这些结果表明PGPM有望用于高效治疗肿瘤。
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