本研究用冻存的禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株第8代传代毒（AEV-VRE₈）通过SPF鸡胚传代复壮，获得了AEV-VRE₉实验用病毒。根据已知AEV-1143株Vp0、Vp1、Vp3基因序列，首先设计了三对引物。分别扩增AEV-VRE₉ Vp0、Vp1、Vp3基因，将扩增的Vp0、Vp1、vp3基因分别克隆到pGEM-T Easy载体中。经测序后，与已知1143株同源性：VP0为95％、VP1为94％、VP3为93％。然后设计表达引物，将扩增Vp0、Vp1、Vp3再克隆到pGEM-T Easy载体中，此次设计引物分别在Vp0、Vp1基因5′端加入BglⅡ、NdeⅠ酶切位点和ATG，3′端分别加上XhoⅠ酶切位点和TTA。Vp3基因5′端加入BamHⅠ、NdeⅠ酶切位点和ATG，3′端加上SalⅠ酶切位点和TTA。然后再用BglⅡ、XhoⅠ对克隆的Vp0、Vp1基因质粒酶切，BamHⅠ、SalⅠ对克隆的Vp3基因进行酶切，回收Vp0、Vp1、Vp3基因片段插入到pGEX-4T-1表达载体内，对重组表达质粒进行酶切和PCR鉴定。将阳性重组子转化到大肠杆菌ER2566细菌内，用IPIG进行诱导表达蛋白，蛋白经电泳、纯化，然后用ELISA方法检测蛋白活性，Vp1蛋白活性相对高于Vp0、Vp3。最后，再将自制VP1板用自配试剂检测其活性，同时用自制板和国外试剂、国外ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样10份血清作比较，三组ELISA检测结果，其中有8份被检血清S／P（抗体水平）大于0.2，为阳性；2份被检血清为阴性。这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致。说明表达VP1蛋白活性达到预期要求，可以用作AE的ELISA诊断。