CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T）细胞疗法自发展之初至今已有30多年的历史,该疗法在人类的抗癌史中具有里程碑式的意义。现今各种CAR-T细胞疗法及相关研究正在如火如荼地进行,研究者们正致力于解决CAR-T细胞治疗中遇到的各项挑战。众多研究中,ACAT1基因的相关功能引起了人们的关注。ACAT1参与编码胆固醇酯化酶,胆固醇酯化酶能够将胆固醇转化为胆固醇酯,调节细胞内的胆固醇水平,进而影响细胞的效应功能。因此,本课题在NKG2D-CAR-T细胞疗法的基础上,进一步研究下调ACAT1基因表达对于NKG2D-CAR-T细胞抗结直肠癌细胞的能力及相关生物学特性的影响。首先,使用本实验室已构建的质粒用于包装慢病毒。从健康人外周血中分离出T细胞,用浓缩的病毒感染T细胞,感染效率达到90%以上。利用Q-PCR、Western Blot对shRNA干扰ACAT1基因的表达效率进行检测,发现ACAT1基因表达被下调了约50%。用效应细胞杀伤结直肠癌细胞（HCT-8）,随着效靶比的升高,shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞抗结直肠癌的作用不断提升,证明下调ACAT1基因的表达可以增强NKG2D-CAR-T细胞的细胞毒性。同时,研究还发现shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞的CD69、CD107a以及IFN-γ和GzmB的表达水平也明显提升,这说明下调ACAT1基因的表达能够提高NKG2D-CAR-T细胞的活化水平和脱颗粒的能力。另外,本研究对下调ACAT1基因的表达后,NKG2D-CAR-T细胞的耗竭、增殖、分化能力也进行了检测。shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞的TIM-3、PD-1的表达较NKG2D-CAR-T细胞有所降低。与NKG2D-CAR-T细胞相比,shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞的增殖也明显增强。除此之外,shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞的分化与NKG2D-CAR-T细胞也有所不同,shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞的T_CM亚群比例增加,免疫记忆性增强,且shACAT1-NKG2D-CAR-T细胞中CD8⁺T细胞比例更多。由此可见,下调ACAT1基因的表达提高了NKG2D-CAR-T细胞的效应功能。本研究以CAR-T细胞疗法为基础,研究下调ACAT1基因表达对NKG2D-CAR-T细胞效应功能的影响,发现下调ACAT1基因表达能够明显增强NKG2D-CAR-T细胞抗结直肠癌的能力。同时可以检测到该CAR-T细胞具有更高的增殖能力、脱颗粒能力、活化水平,耗竭降低,并且能够分化出更多的T_CM亚群。本研究结果为利用NKG2D-CAR-T细胞治疗结直肠癌的研究开拓了新的思路。