目的:本实验通过观察海兔素对人肝癌Hep G2细胞株增殖以及对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制效应,以此探讨海兔素对肝癌的抑制作用及可能的分子机制。方法:1.人肝癌Hep G2细胞株常规培养于含10%胎牛血清的DMEM/HIGH GLUCOSE完全培养基,置于37℃、体积分数为0.05 CO2的细胞恒温培养箱中培养。取对数生长期细胞,分别加入终末浓度为20、40、60、80、100、120mg/L的海兔素溶解液对其进行干预,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测海兔素作用24h、48h后对肝癌Hep G2细胞株增殖的影响;荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染实验检测海兔素对Hep G2肝癌细胞株凋亡的诱导作用。2.昆明种雄性小鼠40只,将其按体重随机分为模型组和海兔素低、中、高剂量组,每组10只。将以生理盐水稀释的H22瘤细胞悬液接种于各组小鼠左前肢腋下皮下组织,建立小鼠H22皮下移植瘤模型。次日,海兔素低、中、高剂量组分别给予海兔素25、50、100mg·kg-1·d-1 0.5m L灌胃;模型组动物则予以等体积大豆色拉油灌胃,实验进行2周。小鼠末次灌胃24h后,称取体质量,摘眼球法取全血,颈椎脱臼法处死动物。完整剥离新鲜移植瘤组织,称重,计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小鼠血清中白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:1.海兔素对人肝癌Hep G2细胞株抑制作用的体外试验效果评价CCK-8实验结果表明,Hep G2肝癌细胞经海兔素干预后,生长增殖能力显著受到抑制,且随药物剂量的增加和干预时间的延长,抑制作用增强(P<0.05),其24h IC25值和IC50值分别为65.36mg/L和103.77mg/L。荧光显微镜Annexin V-FITC/I双染实验检测发现,经65mg/L和105mg/L海兔素干预24h后,Hep G2肝癌细胞凋亡数目较对照组明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2.海兔素对H22荷瘤小鼠体内抑瘤试验效果评价H22荷瘤小鼠经低、中、高剂量海兔素处理后,肿瘤的生长水平显著受到抑制,与模型组相比,瘤块质量呈剂量依赖性显著减轻(P<0.05),其抑瘤率分别为28.31%、33.84%、42.96%。海兔素各剂量干预组小鼠移植瘤组织中MMP-9的阳性表达率与模型组相比,均有不同程度地降低,尤其是50mg/kg、100mg/kg剂量组降低更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);各海兔素组与模型动物组相比,小鼠肿瘤组织中VEGF和PCNA的阳性表达率逐渐降低,并呈一定的剂量依赖关系(P<0.05)。经50mg/kg、100mg/kg海兔素处理后,小鼠血清中IL-6及TNF-α表达水平均显著高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.通过体外细胞培养的方法,运用CCK-8法及荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染实验法,初步证实了海兔素能够有效抑制肝癌细胞的增殖作用,同时显著诱导肝癌细胞发生凋亡。2.海兔素能够在体内抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其作用机制主要表现为以下几个方面:①抑制肿瘤组织周围细胞外基质降解过程②阻碍新血管形成过程③提高机体免疫功能。3.体内、外研究结果显示,海兔素对肝癌具有明显的抑制作用,有望成为一种新型的天然抗癌药物。然而海兔素能否成为有效逆转和治疗肝癌的药物,尚需要进一步的实验研究进行佐证。