Prmt5作为第二类精氨酸甲基转移酶,在基因表达调控、RNA加工、细胞生长分化及信号转导等方面发挥重要作用。本研究以青鳉为实验材料,通过酵母双杂交cDNA文库扫描技术筛选Prmt5的互作蛋白,并对相互作用功能结构域进行了初步探讨。首先以青鳉组织cDNA为模板扩增prmt5全长1905 bp,构建诱饵载体pGBKT7-prmt5。将其转入酵母AH109和Y187细胞后,检测到诱饵蛋白对报告基因无自激活能力,对宿主细胞也无毒性。其次,采用SMARTTM技术构建青鳉鱼苗的酵母双杂交cDNA文库,并对文库进行扩增和大规模转化。文库质量鉴定结果显示,合成的cDNA呈弥散状,大小分布于100～3000 bp范围内。初级cDNA文库库容量约为1.4×106 cfu,插入片段大小在0.5～3.0kb之间,平均插入片段约为1 kb,重组率为100%。结果说明文库cDNA片段多样性良好,长度适合双杂交筛选。再次,将含pGBKT7-prmt5的Y187细胞和含cDNA文库的AH109细胞进行杂交,通过SD/-His-Leu-Trp-Ade四缺营养平板和X-α-gal显色筛选阳性菌。将初步筛选的69个克隆经过4次稳定传代、X-α-gal显色及回复性验证,最终得到8个与Prmt5相互作用的蛋白质。它们分别是甲基转移酶复合体蛋白Mep50、载脂相关蛋白 Apolipoprotein A-I-like(transcript variant X2)、锌指蛋白转录抑制因子Prdm1a和Prdm1b、唾液酸结合Ig样凝集素Siglec12、多功能蛋白ADE2-like、NADH脱氢酶亚基4以及角质化包膜蛋白Sciellin。最后,通过酵母双杂交技术研究了Prmt5、Prdm1a、Prdm1b和Mep50几种蛋白间的相互作用关系及功能位点。X-α-gal显色结果表明,Prdm1a和Prdm1b与Prmt5均存在相互作用,但作用力微弱,而与Mep50却存在很强的作用。Prdm1a和Prdm1b与Mep50连续截短和部分缺失载体的酵母双杂交均存在X-α-gal酶活性,但菌落的生长大小与显色程度差异并不明显,相互作用关键位点还需进一步探究。Prmt5、Prdm1和Mep50之间的作用关系还需用免疫共沉淀等实验证实。与Prmt5相互作用蛋白的发现为进一步阐明Prmt5的功能有重要意义,为进一步研究Prmt5在鱼类发育和生理中的作用奠定基础。