随着社会进步和人民生活方式的改变,犬作为伴侣动物已成为人们生活的一部分。犬细小病毒病、犬瘟热、犬腺病毒感染病毒病严重危害养犬业的发展,目前无有效的治疗药物,主要用疫苗接种进行预防,但免疫效果欠佳。β干扰素(Interferno-β,IFN-β)等干扰素是由动物细胞产生的一类分泌型糖蛋白,具有广谱抗病毒和增强免疫作用,可用于犬病毒病的治疗。目前临床上使用的主要是重组大肠杆菌表达的α干扰素,不仅抗病毒谱受到一定限制,而且纯化过程复杂,生产成本较高。为了增强干扰素对犬病毒病的治疗效果和降低生产成本,本研究将弹性蛋白样多肽(Elastin-like polypeptide,ELP)-蛋白内含肽(intein)介导的新型大肠杆菌表达系统,用于犬β干扰素的表达与纯化,现将研究结果报告如下:1从比格犬耳皮肤组织中提取基因组DNA为模板,通过PCR扩增出犬β干扰素成熟肽编码序列,将扩增产物克隆于质粒载体并进行测序,结果显示与GeneBnak上公布的犬β干扰素基因同源性为100%。2将β干扰素成熟肽编码序列克隆入含ELP与intein融合基因的pET-MIE原核表达载体,将重组表达载体转入大肠杆菌,用温敏诱导法诱导重组菌表达,经SDS-PAGE分析证明,表达的重组β干扰素以可溶性形式存在,分子量为预期大小相符。3利用ELP的温度敏感可逆相变特性,将重组菌的超声波裂解物在不同的温度下进行反复离心,获得纯化的ELP-intein- IFN-β融合蛋白;再利用intein的自动裂解特性,使IFN-β从融合蛋白上释放出来,获得了纯化的重组犬β干扰素,含量约为0.13mg/ml。4以水泡性口炎病毒-犬肾细胞系统,检测纯化重组犬β干扰素的抗病毒活性,结果显示抗病毒活性为106稀释度。