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猫杯状病毒（Feline calicivirus,FCV）属于杯状病毒科（Calicivirdae）水疱疹病毒属（Vesivirus）,是引起猫上呼吸道疾病的一种常见病原。FCV感染后的主要症状是口腔溃疡、打喷嚏、结膜炎、慢性胃肠炎等。近几年出现一些强毒株可引起急性全身性疾病,造成很高的死亡率,严重危害猫的健康。FCV感染宿主后,常常和其他的病原混合感染,这为其诊断带来了困难,因此建立快速高效的FCV检测方法已经迫在眉睫。VP1是FCV的衣壳蛋白,是主要的免疫保护性抗原,在诱导机体产生免疫应答过程中起着重要的作用。VP1分为A-F六个区,B区在125-397aa之间是保守区域,同时可诱导宿主产生非中和性单克隆抗体（MAb）。E区在427-524aa之间,又分为高变区和保守区域,可诱导宿主产生中和性单克隆抗体。本实验首先将FCV毒株FCV2280株的VP1的B、E区序列的重组质粒pET-B、pET-E分别转化到E.coli BL21 Star（DE3）表达菌,经IPTG诱导后均得到大量可溶性表达。纯化的VP1-B、VP1-E蛋白和FCV2280病毒粒子经Western blot检测,三者均具有良好的反应原性。将纯化的VP1-B、VP1-E蛋白分别与弗氏佐剂均匀混合免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术将小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）与免疫后的小鼠脾细胞融合。纯化的FCV2280病毒粒子作为包被抗原,建立间接ELISA方法筛选分泌抗VP1-B、VP1-E蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株系。经过3次亚克隆,共筛选到6株稳定分泌抗VP1-B、VP1-E蛋白的单抗株,其中有4株仅能识别VP1-B蛋白,分别命名为4G2、B1E5、B4G4、B4G5;2株稳定分泌抗VP1-E蛋白的单抗株,分别命名为E2F1、E2F6。IFA和Western blot结果表明4G2、B1E5、B4G4、B4G5、E2F1、E2F6均识别FCV2280、TIG-1、HRB-SS、F9,具有良好的反应性。6株MAbs经过用亚型试剂盒鉴定,重链均为IgG1,轻链均为Kappa链。将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔制备腹水,结果表明VP1-B MAbs4G2、B1E5、B4G4、B4G5单抗株腹水的效价约为1:6553600;VP-E MAbs E2F1和E2F6单抗株腹水的效价约为1:25600和1:12800;中和试验表明6 MAbs单抗均无中和活性。为进一步鉴定VP1-B和VP1-E MAbs的抗原表位,分别将VP1-B逐步截短表达,Western blot结果表明4G2、B1E5、B4G4、B4G5识别的抗原表位均为126DDGSITA132,同时对VP1-E进行截短原核表达和合成短肽进行MAbs抗原表位鉴定,结果表明VP-E MAbs E2F1、E2F6识别的抗原表位均为467YICGSLQRAWG477。因此本研究制备的VP1-B MAbs属于同一株单抗,VP1-E MAbs也属于同一株单抗。与NCBI其他毒株氨基酸序列比对分析的结果表明126DDGSITA132不保守,而467YICGSLQRAWG477相对保守。根据序列比对合成126DDGSITA132和467YICGSLQRAWG477突变氨基酸的表位密码子进行原核表达,鉴定表位突变的氨基酸位点是否与制备的单抗反应,结果表明表位126DDGSITA132中的I130V和A132T突变后不与制备的单抗反应,表位467YICGSLQRAWG477中的S471A突变后仍能与制备的单抗反应。本研究制备的单抗对FCV的基础研究及流行病学调查具有重要的价值。