基因沉默SOCS1增强T细胞对骨髓瘤细胞杀伤效应的研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:PEARTREE123
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目的:通过miRNA沉默细胞因子信号传导抑制因子的编码基因的表达,提高树突状细胞对肿瘤抗原的提呈水平,发挥较强的抗肿瘤杀伤效应。方法:1,根据靶基因设计、合成miRNA oligos并克隆到重组真核表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR中。2,用去内毒素质粒小提试剂盒扩增、提取质粒,并保存。3,从BALB/c小鼠的骨髓中制备骨髓前体细胞,通过GM-CSF和IL-4来诱导生成DC.并通过细胞形态,MLR以及流式检测。4,通过转染试剂LipofectamineTM LTX将各组质粒转染入DC,通过RT-PCR检测DC中SOCS1的表达水平并筛选出沉默效果最佳的阳性质粒组。5,培养P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞并制备肿瘤细胞裂解产物。6,制备小鼠的脾T细胞7,转染后的DC经肿瘤细胞裂解产物致敏后与小鼠脾T细胞、P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞共培养,体外观察DC介导的肿瘤细胞杀伤效应。并做统计学分析。结果:1,成功构建了重组质粒载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR。2,通过RT-PCR证实miRNA能有效下调SOCS1的表达。3,DC的培养和鉴定(细胞形态,PCR, MLR)。4,DC介导的CTL对肿瘤细胞的体外杀伤效应。结论:miRNA下调DC细胞中SOCS1的表达水平,可以提高树突状细胞对肿瘤抗原的提成呈能力,产生更强的抗肿瘤免疫免疫反应。
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