背景:急性肺损伤(ALI)是心源性以外的各种肺内外致病因素引起的弥漫性肺泡-毛细血管膜炎症性损伤,严重的ALI被定义为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。感染是ALI的主要诱因。其病理特征为严重的肺部炎症损伤,表现为肺泡换气功能受损、肺泡萎陷、继发于低氧性肺血管收缩的肺动脉高压、肺泡毛细血管膜通透性增加、肺表面活性物质功能及代谢受损及成分结构改变。吸入一氧化氮(iNO)作为选择性肺血管扩张剂,常规用于治疗新生儿持续低氧血症及肺动脉高压。其选择性舒张肺血管,减少肺动静脉分流的效果得到大量实验及临床研究证实。但是iNO改善成人ALI/ARDS病人氧合的作用不能持久,且未能降低ALI/ARDS的病死率,推测可能与iNO导致肺泡腔第一道防线-肺表面活性物质(PS)的蛋白A(SP-A)硝基化损伤有关。但过度炎症反应及高氧应激本身即可使SP-A产生硝基化。iNO对炎症损伤肺PS的主要活性成分-磷脂酰胆碱(PC)的影响少有报道。对PC代谢的具体环节,如合成、分泌、清除的影响,尚是空白。在成熟肺PS磷脂合成主要经再循环(recycling)和由原料(de novo)合成二条途径,前者约占90%,后者约占10%;而在胎肺de novo合成占主要地位。成熟肺在弥漫性损伤时,再循环比例下降,de novo合成加强。PC 的de novo 合成在ALI时机体抗损伤机制中有重要地位,是肺泡II型上皮细胞(AEC-II)抗损伤机制的一个主要方面。iNO治疗ALI/ARDS必定是和机械通气及高浓度氧气一起使用,长时间暴露会诱发肺损伤。有实验研究报道iNO可减轻动物肺高氧损伤并延长生存。但在肺部存在严重炎症损伤情况下,iNO加高氧对PS代谢的影响及其机制尚不清楚。iNO能减轻肺部的炎症损伤,可能成为预防感染性ALI的有效手段。炎症损伤与PS的代谢密切相关。炎症对PC的合成及分解均有影响,对PC合成的影响表现在对PC合成的关键酶,磷脂酰胆碱胞苷二酰基转移酶(CCT)功能的抑制。外源性及内源性NO对炎症损伤肺的免疫调节作用,构成肺抗损伤及修复机制的一部分。PC合成功能是反映肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-II)在炎症损伤时抗损伤及修复功能的一个重要指标。iNO与高氧对炎症损伤肺PC合成产生的影响是否与此时肺<WP=6>部的炎症反应状态有关,尚未得到深入研究,值得探讨。目的:1. 从PC合成功能的角度,论证iNO在高氧条件下用于肺部炎症损伤的安全性。2. 从PC合成关键酶的功能和表达水平,研究iNO在高氧条件下对PC合成功能的影响机制。3. iNO及高氧对肺炎症反应的影响,及该影响与PC合成功能的关系。方法:清洁级成年雄性SD大鼠(180～200 g)先随机分组接受静脉注射内毒素2 mg/kg体重(简称LPS),和静脉注射等量生理盐水(作为对照组,简称C),24小时后LPS组及C组再分别随机给予吸空气(Air)、95%氧气(O)、20 ppm NO (NO)、20 ppm NO加95%氧气(ONO)4种干预。在开始气体干预的同时,大鼠尾静脉注射[3H]-氯化胆碱15 μCi,不同气体干预10分钟、及4、8、12和24小时(每组每时点n = 6~8 ),测各时点大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及灌洗过的肺组织(LT)中总磷脂(TPL)和饱和磷脂酰胆碱(DSPC)放射活性,以反映合成及分泌TPL、DSPC的能力。并以生化方法检测BALF、LT磷脂代谢池中TPL、DSPC总量。并对BALF中白细胞计数(WCC)。另取大鼠,造模及分组干预同前,不注射示踪剂,不同气体干预4、24小时(每组每时点n = 6~8 )。以[14C]-磷酸胆碱为底物,测肺组织中CCT的活性。以RT-PCR、Western blot法测CCT mRNA与蛋白表达水平。以电泳迁移率法测肺组织核转录因子-κB(NF-κB)活性。以RT-PCR法测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)、白细胞介素-10(IL-10) mRNA表达水平;并检测肺组织湿干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)水平。另取大鼠,造模及分组干预同前。不同气体干预4、24小时(每组每时点n = 5 )。全肺灌流固定用于组织形态学检查及损伤评分。结果:1. 肺PC合成代谢不同干预组PC合成高峰均在注射示踪剂后4小时。此时在Air干预下,全肺TPL放射活性约占示踪剂2.4 ‰,全肺DSPC放射活性约占示踪剂0.5 ‰ 。不同气体干预4小时后,LPS-NO组BALF与全肺(BALF+LT)中TPL(BALF 81±17.6 cpm/g,全肺931±158 cpm/g)、DSPC(BALF 21.2±4.3 cpm/g,全肺217±39.1 cpm/g)的放射活性均显著低于其它气体干预下的LPS大鼠(下降46～59%,P<0.01)。不同干预的LPS组之间,BALF与LT PC代谢池中TPL、DSPC总量,<WP=7>其差异无显著性。不同气体干预24小时后的LPS大鼠BALF与全肺中TPL、DSPC的放射活性均显著低于相同气体干预下的C组(下降24~47%)。LPS-O组BALF与全肺中TPL(BALF 68.8±17.5 cpm/g,全肺603±83.4 cpm/g)、DSPC(BALF 19.8±3.9 cpm/g,全肺102±13.6 cpm/g)的放射活性均显著低于其它气体干预下的LPS大鼠(下降42~53%,P<0.01)。LPS-NO及LPS-ONO组TPL、DSPC合成功能与LPS-Air组相比,其差异无显著性。LPS-O组BALF磷脂代谢池中TPL(4.1±0.8 mg/kg,下降35%)、DSPC总量(1.6±0.4 mg/kg,下降41%),及LT中DSPC(16.0±2.7 mg/kg)总量,显著低于LPS-Air组(TPL 6.3±1.6,DSPC 2.7±0.7,LT中DSPC 21.3±4.2 mg/kg)。LPS-NO、LPS-ONO组BALF及LT中TPL、DSPC总量与LPS-Air相比,其差异无显著性。