玫瑰花降糖成分的提取分离及其药理作用研究

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目的:本研究将提取分离玫瑰花中可水解鞣质类活性成分,对其结构确证;通过动物模型和细胞模型的建立,明确降糖有效成分,解明药效物质基础。方法:1.玫瑰花有效成分的提取分离和结构测定:玫瑰花粉末1500g上加入50%乙醇1.5L,混匀,静置24h,提取3次,合并滤液,浓缩至约200ml。再用等量乙酸乙酯萃取3次,合并,浓缩,冻干。得玫瑰多酚提取物(PERRB),备于药理活性评价实验和有效成分分离实验。玫瑰多酚提取物(10g)通过柱色谱法(Daiaion HP-20、Sephadex LH-20色谱柱等)和半制备型的高效液相色谱(Prep-HPLC)法,反复分离纯化,使用核磁共振(NMR)、质谱(TOF-MASS)等实验数据的综合分析进行表征,确定分离出的化合物结构。2.玫瑰花多酚提取物对2型糖尿病大鼠的影响:将90只SD雄性大鼠(200±20g)随机选出10只作为空白组,其余80只大鼠造模。空白组普通饲料饲养,造模大鼠高脂高糖饲料饲养30天后,禁食16h,造模大鼠注射30mg/Kg STZ,空白组注射等量生理盐水。造模成功后,分为模型组,阳性对照组(0.0378mg/g阿卡波糖),PERRB低剂量组(0.0348mg/g PERRB),PERRB中剂量组(0.0697mg/g PERRB),PRRRB高剂量组(0.1394mg/g PERRB),玫瑰花组(0.81mg/g玫瑰花),给药治疗30天后,禁食12h,10%水合氯醛麻醉大鼠,经腹主动脉取血,离心,分别测定血清葡萄糖(Glu)、胰岛素(INS)、胰高血糖素水平(GC)、糖化血清蛋白(GSP)、胆固醇(TC)、甘油三酯(T G)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)、游离脂肪酸(FF A)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-6)、核因子(NF-k B)。取下肝脏,肾脏,胰腺制备病理切片,取腓肠肌用western blot法测定葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)含量。3.新唢呐草素I(Tellimagrandin I)对胰岛素抵抗(IR)Hep G2细胞糖代谢的影响:通过建立IR模型实验,观察玫瑰花多酚提取物和新唢呐草素I对IR-Hep G2细胞糖代谢的影响。将Hep G2细胞用RPMI1640完全培养基,在37℃,5%CO2的培养箱中恒温培养,每隔2d换一次培养基。当细胞贴壁长满到90%后,进行传代。用CCK-8试剂盒检测细胞活性(活细胞数量)。用1×10-6mo L/L胰岛素溶液建立IR细胞模型,分模型组与给药组(Acarbose组,PERRB组,Tellimagrandin I组),给药组细胞中追加处理药物,培养24-72 h。收集上清的细胞用CCK-8法测定细胞数量。以没有加细胞的培养基作为阴性对照,用Elisa法检测细胞上清中葡萄糖含量并计算出葡萄糖消耗量,并以每孔的细胞数量进行校准。结果:1.玫瑰花多酚的提取率为8.61%,得到129.15g,100g备用于药理实验。对玫瑰花多酚提取物进行柱层析和半制备,分离了一个鞣质类化合物单体,其核磁和质谱数据与参考文献比较,鉴定为新唢呐草素I。2.药物干预30d后,玫瑰和PERRB组大鼠一般状态有所改善,药物干预2周后大鼠体重逐渐稳定。玫瑰和PERRB明显降低T2DM大鼠血清Glu、INS、GC、G SP、TC、TG、LDL-c、MDA含量,有降低TNF-α、NF-κB含量的倾向,提高血清HDL-c、SOD含量,改善肝脏脂肪病变,有效提升骨骼肌GLUT4表达。3.药物分别干预24h、48h、72 h后,PERRB组、Tellimagrandin I组葡萄糖消耗量均明显增加。结论:蒙药玫瑰花的多酚提取物有一定的改善二型糖尿病的作用,并且其中分离出的新唢呐草素I可能为其有效成分。
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