Dicer切割7SL RNA及其切割产物的初步功能研究

来源 :温州医学院 温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:g123838477
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:已有研究表明,Dicer表达下调能够导致Alu序列在人视网膜色素上皮细胞中累积。此外,Dicer还可能将啮齿类动物的内源性SINE/B1 RNA(相当于灵长类动物的Alu序列)切割成小干扰RNA(siRNA)。Alu的产生源于7SL RNA(一个信号识别颗粒的组分),本课题旨在研究Dicer是否可以切割Alu序列及7SL RNA。   方法:   (1)利用Solexa深度测序技术,分析Dicer敲除和对照组HepG2.2.15细胞的小RNA,探究Dicer是否可以切割Alu序列;运用BLAST和SOAP2软件将小RNA测序结果与人的7SL RNA序列进行比对,分析Dicer是否可以切割7SL RNA;使用人类重组Dicer蛋白对7SL RNA进行体外切割,研究Dicer能否切割7SLRNA。   (2) Northern blot验证Dicer切割7SL RNA生成小分子RNA。   (3)构建7SL RNA的小RNA切割产物(7SL sRNA5cd和7SL sRNA8b)的荧光素酶报告基因载体,在HepG2.2.15和HEK293T细胞中分别进行荧光素酶活性检测,分析这两个小分子RNA与miRNA的功能是否相同。   (4)运用RNA免疫共沉淀技术,研究7SL RNA产生的小分子RNA是否能与Argonaute蛋白结合形成RNA诱导的沉默复合体(RISC)。   (5)在HepG2.2.15和HEK293T细胞中先过表达7SL sRNA5cd或7SL sRNA8b,然后运用ChIP及实时定量RT-PCR技术研究7SL RNA产生的小分子RNA是否能调节7SL RNA的表达。   结果:   (1)在敲除Dicer的细胞中,源于Alu序列的小分子RNA显著减少,表明Dicer在HepG2.2.15细胞中能够切割Alu序列。   (2)小RNA测序结果表明Dicer能够将7SL RNA切割成不同长度的片段(18-23nt),片段主要富集于两个区域,分别命名为7SL sRNA5cd和7SLsRNA8b。Northern-blot证实7SL RNA可被Dicer切割。   (3)7SL RNA来源的小分子RNA(7SL sRNA5cd,7SL sRNA8b)与miRNA(如miR-31)的功能不类似。   (4)7SL sRNA5cd和7SL sRNA8b均不能调节7SL RNA表达。   结论:7SL RNA可以被Dicer切割成不同长度的片段,但是其产物的生物学功能目前还尚不清楚。  
其他文献
金属及金属氧化物与小分子的化学反应是一个非常热门的研究领域。深入探究金属中心与O2,CO2,CO,N2,H2,CH4等小分子的相互作用,对了解金属原子催化活化O-O,C-O,N-N,H-H,C-H等
男人和女人,本应站在同一起跑线上,每个人都是独立的整体,每个人都要有自己独立的信念和意志,以张扬自己作为一个生命的活力。然而由于社会原因,历史上确乎存在着太多男女间的不平等。尤其女性,一代又一代地唱着一曲不老的悲歌。她们曾不断地寻找幸福,又无奈地看着幸福如过眼烟云,飘散了,消逝了,握在手中的仅是一把沧桑的记忆和挥之不去的愁怨。我国古代文学史上的诗歌创作,一直对此进行着不倦的观照。  先秦时期,由于