NDRG2在多种胰岛β细胞系的表达及其对胰岛素合成的影响

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目的NDRG2(N-Myc down-stream regulated gene)是N-Myc下游调节基因(NDRG)家族的重要成员之一,NDRG家族还包括NDRG1、NDRG3和NDRG4。目前研究发现该家族与细胞的增殖分化,应激反应及激素的代谢调节等方面相关。人源NDRG2是我校生化教研室首先发现并被命名的(AF159092)新基因,并被GenBank收录,人与小鼠NDRG2同源性高达95%。前期研究发现NDRG2在胰腺组织中主要分布于胰岛细胞的细胞质中,且与胰岛素的表达分布一致,为了验证NDRG2与胰岛素之间的关系,我们从细胞及动物水平进行了研究,从而进一步阐明其生物学功能和作用机制。方法①通过间接免疫荧光和免疫组织化学的方法明确Ndrg2在四种胰岛细胞系(MIN6、TC3、 TC6、INS-1)及小鼠胰腺组织中的分布与定位;②通过免疫印迹及RT-PCR的方法检测NDRG2在四种胰岛细胞系(MIN6、 TC3、 TC6、INS-1)中的表达;③通过RNAi的方法下调NDRG2后,观察INS-1,MIN6细胞中胰岛素mRNA的变化;④通过间接免疫荧光的方法观察siRNA下调NDRG2后,在MIN6细胞中NDRG2、PDX-1的表达与分布变化;结果①NDRG2与胰岛素共同分布在胰岛细胞胞质中。②NDRG2在四种胰岛细胞系中都有表达,其中在INS-1及MIN6细胞中表达相对较高。③在INS-1和MIN6细胞中,下调NDRG2,通过实时定量PCR检测胰岛素mRNA水平,发现NDRG2与胰岛素mRNA表达呈负相关。④在MIN6细胞中,下调NDRG2未能影响PDX-1的表达与活性,PDX-1的荧光强度和细胞定位没有明显变化。结论①NDRG2主要表达在胰岛细胞的胞质中,在四种胰岛细胞系及小鼠胰岛细胞中NDRG2与胰岛素分布情况一致。提示NDRG2在胰岛细胞中发挥着重要的生物学功能。②在四种胰岛细胞系中,在蛋白及mRNA水平均检测到NDRG2的表达,其中在INS-1及MIN6细胞中表达相对较高。推测表达量的高低可能与细胞本身有关。③在胰岛细胞系INS-1,MIN6中,下调NDRG2后发现,NDRG2与胰岛素mRNA的表达存在负相关。推测NDRG2可能作为蛋白激酶Akt的底物参与胰岛素信号通路。④在MIN6细胞中,下调NDRG2没有影响PDX-1的表达与分布。提示NDRG2与胰岛素之间的相关性可能不通过PDX-1调控。
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