两种甜菜夜蛾核型多角体病毒对离体细胞的侵染和增殖特性

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leon_xu23
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甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spotoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus, SeMNPV)是一种防治甜菜夜蛾的重要病原微生物,因具有杀虫专一、杀虫效果好、对环境无污染等优点,被广泛应用。本研究对新分离得到的甜菜夜蛾核型多角体病毒(B种)与甜菜夜蛾核型多角体病毒美国分离株(A种)的生物学特性进行了比较,主要包括BV增殖特性、对不同细胞的感染症状、感染率、多角体产量以及对幼虫毒力等方面,并对病毒可诱导产生凋亡的Se-1细胞进行了细胞克隆,其主要结果如下:  1)利用两种甜菜夜蛾核型多角体病毒感染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)胚胎细胞系BTI-Tn5B1-4(High Five, H5)和Tn-9-4、草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf-9、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)胚胎细胞系Se-1、Se-2、Se-3、粘虫(Mythimna separata)胚胎细胞系 Ms10-1、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)胚胎细胞系 Cp-E-11、棉铃虫(Helicoverpa armigera)胚胎细胞系Ha-E-5、华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)胚胎细胞系Ho-3、Ho-4、Ho-6、暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela)胚胎细胞系Hp-E-1、Hp-E-21、Hp-E-22等8种昆虫的15种细胞系。发现两种病毒均对细胞系Cp-E-11、Ha-E-5、Ho-3、Ho-4、Ho-6、Hp-E-1、Hp-E-21、Hp-E-22没有影响,细胞正常生长,细胞系H5、Sf-9、Tn-9-4、Se-3则出现典型的病毒感染症状,即感染后期细胞内充满多角体,细胞系Ms10-1感染后少量细胞内出现多角体,大部分细胞出现碎裂的现象,细胞Se-1、Se-2一部分细胞被感染,一部分细胞发生凋亡,两种病毒引起的细胞病变情况没有明显的差别,二者的寄主范围相同。  2)测定比较了两种甜菜夜蛾核型多角体病毒A种和B种对多株敏感细胞系的感染率以及病毒产量,发现SeMNPV A种的细胞感染率和病毒产量均高于SeMNPV B种,且两种甜菜夜蛾核型多角体病毒对甜菜夜蛾细胞系Se-2和Se-3的感染率以及多角体产量具有显著差异性,SeMNPV A种病毒和SeMNPV B种病毒在Se-2细胞中感染率分别为93.55%和35.83%,多角体产量分别为1.96×106PIB/mL和6.20×105 PIB/mL;SeMNPV A种病毒和SeMNPV B种病毒在Se-3细胞中感染率分别为97.52%和94.11%,多角体产量分别为1.43×106PIB/mL和6.80×105 PIB/mL,对其他细胞的细胞感染率和病毒产量差异均不显著。两种病毒对来源于异源寄主的细胞系H5、Sf9的感染率和多角体产量均较高,对同是来源于甜菜夜蛾胚胎组织的细胞系感染率和病毒产量存在很大差异,而且对Se-3感染率和多角体产量要远高于Se-1和Se-2。  3)对两种病毒进行BV生长曲线测定发现,两种病毒的BV增殖过程均为一个先上升后下降的过程,SeMNPV B种在接种的24h~120h,病毒滴度逐渐增加,接种120h达到最大值,120h后病毒滴度逐渐下降,SeMNPV A种在接种的24h~96h,病毒滴度逐渐增加,接种96h达到最大值,96h后病毒滴度逐渐减少,两种病毒的总趋势是一致的。  4)利用甜菜夜蛾细胞系Se-3增殖两种病毒并测定比较两种病毒对甜菜夜蛾4龄幼虫的毒力,结果表明SeMNPV B种和SeMNPV A种的LC50分别为2.15×105 PIB/mL和1.01×106 PIB/mL,SeMNPV B种的毒力稍高于SeMNPV A,但是二者差异不显著。  5)对病毒可使其产生凋亡和感染现象的甜菜夜蛾细胞系Se-1进行了克隆,共得到克隆株20株,进行RAPD检测结果表明,20株细胞克隆株的扩增谱带均与原始细胞Se-1相同,表明20株细胞克隆株均来自于原始细胞系Se-1。分别对20株克隆株进行凋亡检测,筛选得到凋亡率高的克隆株Se-1-B和感染率较高的克隆株Se-1-C。  结果表明两种甜菜夜蛾核型多角体病毒的细胞寄主范围相同,对敏感细胞的感染症状相同;在细胞感染率和多角体产量方面,SeMNPV A种的细胞感染率和病毒产量高于SeMNPV B种,SeMNPV B种和SeMNPV A种的BV增殖过程均为一个先上升后下降的过程;在对幼虫毒力方面,SeMNPV B种的毒力稍高于SeMNPV A种,但是差异不显著。
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