目的:随着社会的不断进步,人们对医学检验多样性的要求已越来越高,医学检验已不再仅仅是在大医院才开展,它已经进入到社区、家庭、现场等需要其存在的地方。为了肝功、血脂等生化检验项目的操作更简便、仪器携带更方便、试剂保存更容易;为了使常规生化检验随时随地都可开展,以满足健康体检、社区医疗服务的需要,我们探讨研制一种多孔生化反应板,将血糖血脂和肝功相关的七个常规生化指标组合在一起,通过对方法进行改良与改进,制成干化学试剂,探讨同步检测的可行性,将多孔生化反应板与微型生化分析仪相结合,开发干试剂型多项目微型生化分析仪,以达到快速、简便检测的目的。该项目的成功也为开发适用范围更广、功能更完善的类似检验装置奠定基础。由于本项目由多人协同攻关,这里重点介绍血糖血脂和肝功相关的几个生化干试剂的研制。方法:1、为每一个测定的项目选择一种合适的方法及试剂盒,要求试剂可以配制成单试剂工作液,能够完全冷冻干燥,检测波长在380nm～780nm之间。2、对试剂和测定方法进行改良和改进,使检测方法能适应干试剂法检测的需要。用自行合成的高灵敏色原——TBHBA替换葡萄糖试剂中的苯酚色原,其它方法根据需要调整样品试剂稀释比,提高方法的灵敏度。3、将试剂工作液制成干试剂,对干燥的方法进行比较。采取冷冻干燥的方法时,加入冻干添加剂改善干试剂的复溶性和反应性,对添加剂的种类和浓度进行筛选。4、对关键的检测条件进行统一,以满足多项生化板同步检测的需要。将反应体系的终体积定为200μl,使测量光径约为7mm,反应温度为37℃,反应时间为10min,观察测定方法的线性范围和灵敏度,并与生化分析仪方法进行比较。5、用建立的干试剂方法对40例标本的血糖血脂和肝功进行同步检测,将结果与生化分析仪结果进行比较,探讨干试剂方法同步检测血糖血脂和肝功的可行性。主要结果:1、以TBHBA替代酚试剂,添加10g/L白蛋白冻干葡萄糖(氧化酶法)试剂,增加稀释倍数,提高了反应速度,灵敏度提高了4.6倍,增加了线性范围,降低了检测限,优化的方法测定结果与全自动生化分析仪结果具有较好的一致性。2、添加10g/L甘氨酸冻干甘油三酯(氧化酶法)试剂,降低稀释倍数至1:50稀释样品对TG进行测定,结果较好的兼顾了灵敏度和线性范围,显色稳定性较好,测定结果准确可靠,具有实用性。3、添加10g/L白蛋白冻干总胆固醇(氧化酶法)试剂,降低稀释倍数至1:50稀释样品,结果较好的兼顾了灵敏度和线性范围,显色稳定性较好,测定结果与生化分析仪的结果具有较好的一致性。4、没有找到适合冻干总蛋白和白蛋白试剂的添加剂,初步考察了不加添加剂的情况下冻干试剂的线性范围和灵敏度,发现总蛋白超过80g/L、白蛋白超过40g/L时出现偏离线性的现象,灵敏度都有待提高。5、选取了一种重氮试剂测定总胆红素,用水溶解发色剂,然后冷冻干燥,用原装试剂盒的溶解液稀释标本进行检测,方法的灵敏度较高,结果准确可靠。6、选用丙酮酸氧化酶法试剂盒以速率法测定ALT,添加10g/L白蛋白冻干试剂,ALT在336IU/L以下时线性良好(r=0.9978),该方法测定结果与与乳酸脱氢酶紫外动力学法结果相比具有较好的一致性。7、同步检测的结果与全自动生化分析仪结果相关性都在0.95以上,系统比例误差和恒定误差都在可接受的范围内,两方法具有较好的一致性。结论:1、通过对方法的改进和改良,研制出了可结合多项生化板一步法测定血糖血脂和肝功的干试剂。2、初步建立的血糖血脂和肝功的干试剂微量检测法使生化试剂的保存和携带更方便,检测过程更简便,能更好的满足现场快速检验的需要。3、多指标统一检测条件,满足了同步化检测的需要,为简化操作步骤、缩短报告时间创造了条件,也为多项生化板与微型生化分析仪的有效结合奠定了基础。