论文部分内容阅读
利用正向诱变策略和反向遗传策略创建研究水稻抗稻瘟病基因Piz-t抗性分子网络的材料。正向诱变策略是,利用EMS和Y-射线诱变NPB-Piz-t-HA转基因水稻种子,得到M2纯合突变体库;对NPB-Piz-t-HA突变体库进行大规模的筛选,旨在寻找影响抗病基因Piz-t抗性功能的重要元件。反向遗传策略是,选择Ossgtl和Osrarl这两个对许多植物的抗病基因介导的抗性所必须的重要基因,构建其RNAi表达载体,来研究其对基础抗病以及Piz-t介导抗性的影响。本研究主要结果如下:1、筛选鉴定了Pi9-cMyc转基因植株,验证了Pi2-AcV5纯合转基因植株的稳定表达,为进一步创建Pi2-AcV5、Pi9-cMyc突变体奠定了基础。2、构建了Piz-t-HA突变体规模化筛选体系。包括EMS和γ-射线诱变处理的Piz-t-HA纯合M2变体库的建立,Pizt-HA突变体的规模化稻瘟菌接种、抗性鉴定与病斑筛选,以及对Piz-t-HA感病突变体的检测(离体接种、蛋白印迹、测序、杂交验证等方法)等。经过四批次的筛选,并通过候选分子、抗性鉴定,初步获得了M4-1、M4-2、M4-7共3个抗性功能缺失的候选株系,以及32株有待进一步检测的M2植株。3、成功构建了hpRNAi结构的TA克隆载体pC2300-XUN,以及RAR1和SGT1的RNAi植物表达载体:pC2300-XUN-Osrar/-RNAi和pC2300-XUN-Ossgt1-RNAi,并得到了pC2300-XUN-Ossgt1-RNAi转入日本晴以及SC114(携带Piz-t-HA)的转基因阳性克隆植株分别为25株和24株;pC2300-XUN-Osrar1-RNAi转日本晴以及SC114(携带Piz-t-HA)的转基因阳性克隆植株分别为26株和8株。