锯缘青蟹是我国沿海名贵重要的经济蟹类品种。随着蟹类人工养殖的迅速发展,病害给养殖业带来了巨大损失。因此,对锯缘青蟹病害的综合防治的研究和探索,特别是其有关免疫学特性的研究,寻找与抗菌、抗病有关的防御因子将有助于了解蟹类的免疫机理,对于控制蟹类疾病具有重要价值。本课题采用1-DE蛋白质组学技术对锯缘青蟹感染副溶血弧菌后,血淋巴、肝胰腺、肌肉等多种组织中蛋白表达的差异进行比较,鉴定到血蓝蛋白、cryptocyanin等免疫相关蛋白。并在此基础上,对血淋巴和血蓝蛋白在血细胞凝集、细菌凝集以及抑制细菌中的作用进行比较系统的研究,探讨了血蓝蛋白的免疫活性问题。实验结果显示,锯缘青蟹感染副溶血弧菌后,血淋巴中出现1条明显差异蛋白条带(命名为SP),鉴定为cryptocyanin。此外,我们还鉴定出ion transport-like peptide、actin和bacteria responsive protein 2等三种分别存在于锯缘青蟹肌肉和肝胰腺中可能参与防御作用的蛋白。通过对锯缘青蟹血淋巴和肝胰腺蛋白样品的1-DE及1-D immunoblot分析后发现,相对分子质量为75kDa的蛋白条带均能与兔抗血蓝蛋白特异性结合,说明此蛋白确实是锯缘青蟹的血蓝蛋白。其后,在对锯缘青蟹感染副溶血弧菌后0-36 hr的血淋巴中血蓝蛋白浓度的分析中发现,血蓝蛋白浓度出现先逐渐减少后上升,然后再恢复至正常水平的变化。由此说明,血蓝蛋白确实是锯缘青蟹体内的一个重要的免疫效应因子。在此基础上,为了进一步探讨血蓝蛋白的免疫活性问题,我们分别进行了凝集实验和体外抑菌实验。凝集实验结果表明锯缘青蟹血淋巴和血蓝蛋白对细菌和脊椎动物红细胞均具有一定凝集作用,表现出明显的凝集活性。实验还发现大肠杆菌K12的FadL、YbjP、OmpG、Tsx、OmpF和NlpB等六种外膜蛋白能与血蓝蛋白特异性结合。体外抑菌实验表明,血蓝蛋白对大肠杆菌K12和副溶血弧菌均有直接的抑制作用,但亲和层析分离、纯化的不同组分抑制效果存在差异,并且同一组分对不同细菌的效果也有一定差异,表现出血蓝蛋白组分的多样性。这从一个侧面反映出血蓝蛋白与锯缘青蟹的的免疫防御能力密切相关。本课题为研究血蓝蛋白在锯缘青蟹的免疫抗病作用提供了较好的实验依据,为进一步研究血蓝蛋白在虾、蟹等甲壳类动物中的免疫地位以及对丰富和发展甲壳类动物免疫系统的基础研究及指导免疫学防治具有积极的意义。