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乳腺癌是威胁女性生命健康的头号杀手,激素受体阴性乳腺癌因雌激素受体α(ERα)及孕激素受体(PR)表达阴性而被认为对内分泌治疗无效且预后较差。1996年Mosselman等人发现了雌激素受体的另一个亚型雌激素受体β(ERβ),其后又发现了ERβ的众多异构体及变异体,使其随即成为了内分泌治疗的又一个研究热点。回顾性研究发现,乳腺癌患者中大约50%表达ERβ,更加值得注意的是其中存在一部分ERα-/ERβ+患者,这让人们怀疑传统意义上激素受体阴性乳腺癌内分泌治疗无效的论断。所以ERβ能否成为传统意义上激素受体阴性患者内分泌治疗的新靶点及疗效预测因子引起了我们的关注。目前国内外相关研究虽不少,但结论各异,许多实验存在多种因素的干扰及实验设计上的缺陷。所以,我们拟通过本实验,排除ERα、PR、ERF家族及ERβ亚型等因素的干扰,对ERβ单独表达可能的作用进行验证。目的:通过对三阴性乳腺癌细胞转染雌激素受体β(ERβ)及其异构体ERβ△,试图了解ERβ单独表达状态对癌细胞生长的影响、及对雌激素、三苯氧胺(tamoxifen)作用的反应性;探讨ERβ是否有可能成为激素受体阴性,尤其是三阴性乳腺癌内分泌治疗的预测因子和新的治疗靶点,以及其可能的作用机制。方法:(1)构建真核细胞表达克隆pReceiver-M72-ERβ及其剪切体pReceiver-M72-ERβ△。(2)脂质体法转染人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231,设ERβ组、ERβ△组,空载体组及空白对照四组。(3)转染后20小时通过荧光显微镜,免疫荧光、免疫组化、Western Blot等方法验证蛋白表达,按实验设计分别加入不同药物浓度的三苯氧胺、雌激素。(4)MTT法检测细胞相对活性,流式细胞术观察细胞周期情况。结果:(1)以IRES2-EGFP为蓝本改造的pReceiver-M72-ERβ及其剪切体pReceiver-M72-ERβ△成功构建。(2)转染MDA-MB-231细胞20小时后ERβ及其剪切体ERβ△表达增加,灰度计算与空载体及空白对照对比具有统计学差异(P<0.05)。(3)与空白组和空载体相比,转染ERβ细胞生长速度加快,细胞周期中G1期比例减少,S期比例增加,克隆形成能力增强。雌激素及三苯氧胺作用不明确。结论:ERβ在无其他亚型及ERα存在下促进肿瘤生长,增加细胞相对活性及克隆形成能力;三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中对雌激素及雌激素抑制剂三苯氧胺反应性无差异。